褐藻胶寡糖对D-半乳糖诱导小鼠白内障的影响(3)
1.2.2 晶状体混浊度观察及评分 实验结束后,摘取小鼠眼球并在生理盐水中清洗3次,解剖显微镜下分离晶状体。根据SIPPEL[4]描述的晶状体混浊度评分标准,将晶状体混浊度分为0~5分。0分:晶状体透明,无空泡;1分:晶状体透明,空泡少于3个;2分:晶状体透明,空泡多于3个;3分:空泡覆盖整个晶状体表面;4分:晶状体部分混浊;5分:晶状体完全混浊。1.2.3 苏木精-伊红染色(HE染色) 应用HE染色观察晶状体细胞形态变化。将摘取的眼球在生理盐水中清洗3次,迅速置于40 g/L甲醛缓冲溶液中固定,二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水,石蜡包埋,切片后经过脱水、HE染色、透明、封片处理后,应用光学显微镜观察晶状体上皮细胞形态结构变化。
1.2.4 Western blot方法检测晶状体Bax、Bcl-xl和caspass-3蛋白的表达 收集各组小鼠至少10个晶状体样本,应用4 ℃磷酸盐缓冲液冲洗3次,滤纸吸干后称质量,按质量体积比1∶9加入4 ℃的磷酸盐缓冲液,于冰上经研磨棒充分研磨后,制成100 g/L的晶状体匀浆,低温12 000 r/min离心5 min,留取上清液。加入RIPA裂解液提取蛋白 ......
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