褐藻胶寡糖对D-半乳糖诱导小鼠骨质疏松的作用(3)
1.2.4 RT-PCR检测股骨组织p47 phox、gp91 phox和RANKL mRNA的表达 药物干预完成后，取每组各3只小鼠的股骨组织进行液氮研磨，加Trizol 50～100 g/L，颠倒混匀室温放置30 min。4 ℃下以12 000 r/min离心5 min，弃沉淀，加1/5体积氯仿，充分震荡混匀后置于冰上静置5 min。4 ℃下以12 000 r/min离心15 min，将上清转移至新的1.5 mL EP管中。加入与上清等体积的异丙醇，充分震荡混匀，置于冰上静置10 min。4 ℃下以12 000 r/min离心10min，弃上清，加体积分数0.75的乙醇溶液悬浮沉淀。4 ℃下以12 000 r/min离心5 min，吸除上清，自然晾干后加入10 μL DEPC水溶解RNA。用Nanodrop分光光度计测定RNA浓度，用逆转录试剂盒将mRNA逆转录为cDNA。应用RT-PCR法进行扩增，扩增条件：95 ℃、600 s ......
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