然而，HSP的确诊必须依靠基因检测。传统的基因测序方法主要为Sanger测序，它属于第一代DNA测序技术。其基本原理是，在反应体系中加入一定比例带有放射性核素标记的某种2′，3′-双脱氧核苷酸(ddNTP)，通过凝胶电泳和放射自显影，可以根据电泳带的位置确定待测分子的DNA序列[30-31]。受试基因的选择取决于在家族中观察到的表型(单纯/复杂型)、首发症状出现时的年龄和遗传方式。例如，在单纯型常染色体显性遗传HSP病人中，SPAST的分子检测优先考虑发病年龄大于10岁的病人，而ATL1首先考虑在发病年龄小于10岁的病人中进行分析。如果这些基因的分析是阴性的，那么需要更进一步筛选REEP1、KIF5A、NIPA1等基因[19]。由于Sanger测序不支持检测杂合子微重排改变基因，从而建立了一种测量每个外显子数量的方法，例如多重连接依赖探针扩增(MLPA)和定量PCR，建议与Sanger法同时进行测序[19]。

    近几年，新技术如微阵列和二代测序(NGS)分别检测全基因组中存在的拷贝数变异和小变异，彻底改变了用于基因鉴定的策略，能够对小家族和零星病例进行分析。NGS技术通常用于研究或诊断目的的全外显子测序(即对一个基因组的所有编码区域进行测序)和选定基因(基因板)的测序[19] ......