益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达的影响(1)
【中图分类号】R587.1【文献标识码】D【文章编号】1672-5085(2008)02-0010-02
【摘要】目的：观察益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达的影响。方法：高脂饲料喂养，一次性尾静脉注射STZ30 mg/kg造模；益气养阴通络方治疗。免疫荧光法、Westernblotting检测骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达。结果：益气养阴通络方可降低骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达。结论：益气养阴通络方降低2型糖尿病高血糖、增加胰岛素敏感性的作用可能与其降低骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达有关。
【关键词】2型糖尿病；益气养阴通络法；蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)；胰岛素抵抗(IR)
The profit gas raises cloudyly passes winds the side to 2 diabetes big mice skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression influence Yang Huabing Wu Yong Xu Danlin
, 百拇医药
【Abstract】Objective:The observation profit gas raises cloudyly passes winds the side to 2 diabetes big mice skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression influence. Method: The high fat feed feeds, disposable tail intravenous injection STZ30 mg/kg makes the mold; The profit gas raises cloudyly passes winds the side treatment. Immunity fluorescence means, Westernblotting examination skeletal muscle, fatty tissue PTP-1B protein expression. Result：The profit gas raises cloudyly passes winds only then reduces the skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression. Conclusion: The profit gas raises cloudyly passes winds the side to reduce 2 diabetes high blood sugars, the increase insulin sensitive function is possible if to reduce the skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression concerns.
, 百拇医药
【Key words】2 diabetes; The profit gas raises cloudyly passes winds methods; Protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B); Insulin resistance (IR)
导师邱幸凡教授创立益气养阴通络方(生黄芪、玄参、生晒参、麦冬、水蛭、川贝、山药、丹参)。前期实验表明益气养阴通络方能降低2型糖尿病大鼠血糖水平，缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，提高2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织的胰岛素敏感性。本课题旨在通过观察益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达的影响，进一步探讨本方对2型糖尿病作用的分子机制。
1 材料和方法
1.1 动物:雄性SD大鼠60只(8w龄，体重200±20g)由武汉大学医学院实验动物中心提供(合格证号：NO.SCXK(Hubei)2005-0003)。
, 百拇医药
1.2 药物:生黄芪、玄参、生晒参、麦冬、水蛭、川贝、山药、丹参，购自湖北中医附院中药房，煎煮浓缩成1g生药/ml、2g生药/ml的水煎液。
1.3 主要试剂与仪器:
链脲佐菌素(STZ,批号AB0162-050921)；FITC标记的羊抗兔IgG(编号BA0052)，Sigma公司。抗-α-PTP-1B 多克隆抗体(编号05-088)，Upstate Biotechnology Inc。增强化学发光(ECL)检测试剂盒(编号E20056)，Gaithersburg，MA，USA。变性凝胶电泳和免疫印迹所用试剂及仪器，Palo Alto，CA USA和Bio-Rad (Richmond，CA，USA)。One touch Ultra血糖测定仪，美国Johnson & Johnson公司；SN-682型放射免疫γ计数器，上海核福光电仪器有限公司；LD4-2型高速离心机，北京医用离心机厂；820型切片机，American Optical公司；荧光显微镜，日本Olympas公司；电泳仪，半干转膜仪，BIO-RAD；HPIAS-1000型高清晰彩色病理图像免疫组化测量系统。
, 百拇医药
1.4 模型的建立与分组:
高脂饲料(含脂肪41%，碳水化合物41%，蛋白质18%)喂养2w后，一次性尾静脉注射STZ30mg/kg，72h后测FBG，稳定在13.5mmol/ L 以上者为造模成功[1、2]。正常组给予正常饲料。分组：益气养阴通络方中剂量组(中药Ⅰ组)、益气养阴通络方高剂量组(中药Ⅱ组)分别给予益气养阴通络方1g/ml、2g/ml灌胃；正常组、病理组给予生理盐水灌胃，剂量均为2ml/d，1次/d，治疗期间饮食不变，治疗周期为 8w。
1.5 指标的检测:大鼠分别于给药第8w末禁食12h，从尾静脉采血在OneTouch Ultra血糖仪上测FBG；颈动脉插管放血，收集血液3ml，分离血清，放射免疫分析法测FINS水平，ISI=ln[1/(FPG×FINS)][3]。免疫荧光法测骨骼肌PTP-1B蛋白表达。取大网膜周围脂肪组织，以中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡
, 百拇医药
包埋、切片(厚度为5 μm)，3% H2O2室温孵育5～10min；5%～10%正常山羊血清封闭；滴加抗-α-PTP-1B抗体(一抗)，37℃恒温摇床中孵育1～2h；滴加FITC标记的羊抗兔IgG(二抗)，37℃恒温摇床中孵育10～30min；在荧光显微镜下用紫外光激发，观察标记效果；HPIAS-1000型全自动图像分析系统计算平均光密度值。Westernblotting测脂肪组织PTP-1B蛋白表达。取50g大网膜周围脂肪组织样本匀浆，电泳，转印到NC膜上，丽春红可逆染色；封闭2h；与一抗抗-α-PTP-1B多克隆抗体在4℃下孵育过夜；与辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1h；在检测试剂A和B(ECL试剂盒)的混合液中孵育约1 min；曝光、显影、洗像；与淬灭缓冲液孵育40 min，检测β-actin。, 百拇医药(杨化冰 吴 勇 徐丹林)
【摘要】目的：观察益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达的影响。方法：高脂饲料喂养，一次性尾静脉注射STZ30 mg/kg造模；益气养阴通络方治疗。免疫荧光法、Westernblotting检测骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达。结果：益气养阴通络方可降低骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达。结论：益气养阴通络方降低2型糖尿病高血糖、增加胰岛素敏感性的作用可能与其降低骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达有关。
【关键词】2型糖尿病；益气养阴通络法；蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)；胰岛素抵抗(IR)
The profit gas raises cloudyly passes winds the side to 2 diabetes big mice skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression influence Yang Huabing Wu Yong Xu Danlin
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【Abstract】Objective:The observation profit gas raises cloudyly passes winds the side to 2 diabetes big mice skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression influence. Method: The high fat feed feeds, disposable tail intravenous injection STZ30 mg/kg makes the mold; The profit gas raises cloudyly passes winds the side treatment. Immunity fluorescence means, Westernblotting examination skeletal muscle, fatty tissue PTP-1B protein expression. Result：The profit gas raises cloudyly passes winds only then reduces the skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression. Conclusion: The profit gas raises cloudyly passes winds the side to reduce 2 diabetes high blood sugars, the increase insulin sensitive function is possible if to reduce the skeletal muscle, the fatty tissue PTP-1B protein expression concerns.
, 百拇医药
【Key words】2 diabetes; The profit gas raises cloudyly passes winds methods; Protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B); Insulin resistance (IR)
导师邱幸凡教授创立益气养阴通络方(生黄芪、玄参、生晒参、麦冬、水蛭、川贝、山药、丹参)。前期实验表明益气养阴通络方能降低2型糖尿病大鼠血糖水平，缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，提高2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织的胰岛素敏感性。本课题旨在通过观察益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达的影响，进一步探讨本方对2型糖尿病作用的分子机制。
1 材料和方法
1.1 动物:雄性SD大鼠60只(8w龄，体重200±20g)由武汉大学医学院实验动物中心提供(合格证号：NO.SCXK(Hubei)2005-0003)。
, 百拇医药
1.2 药物:生黄芪、玄参、生晒参、麦冬、水蛭、川贝、山药、丹参，购自湖北中医附院中药房，煎煮浓缩成1g生药/ml、2g生药/ml的水煎液。
1.3 主要试剂与仪器:
链脲佐菌素(STZ,批号AB0162-050921)；FITC标记的羊抗兔IgG(编号BA0052)，Sigma公司。抗-α-PTP-1B 多克隆抗体(编号05-088)，Upstate Biotechnology Inc。增强化学发光(ECL)检测试剂盒(编号E20056)，Gaithersburg，MA，USA。变性凝胶电泳和免疫印迹所用试剂及仪器，Palo Alto，CA USA和Bio-Rad (Richmond，CA，USA)。One touch Ultra血糖测定仪，美国Johnson & Johnson公司；SN-682型放射免疫γ计数器，上海核福光电仪器有限公司；LD4-2型高速离心机，北京医用离心机厂；820型切片机，American Optical公司；荧光显微镜，日本Olympas公司；电泳仪，半干转膜仪，BIO-RAD；HPIAS-1000型高清晰彩色病理图像免疫组化测量系统。
, 百拇医药
1.4 模型的建立与分组:
高脂饲料(含脂肪41%，碳水化合物41%，蛋白质18%)喂养2w后，一次性尾静脉注射STZ30mg/kg，72h后测FBG，稳定在13.5mmol/ L 以上者为造模成功[1、2]。正常组给予正常饲料。分组：益气养阴通络方中剂量组(中药Ⅰ组)、益气养阴通络方高剂量组(中药Ⅱ组)分别给予益气养阴通络方1g/ml、2g/ml灌胃；正常组、病理组给予生理盐水灌胃，剂量均为2ml/d，1次/d，治疗期间饮食不变，治疗周期为 8w。
1.5 指标的检测:大鼠分别于给药第8w末禁食12h，从尾静脉采血在OneTouch Ultra血糖仪上测FBG；颈动脉插管放血，收集血液3ml，分离血清，放射免疫分析法测FINS水平，ISI=ln[1/(FPG×FINS)][3]。免疫荧光法测骨骼肌PTP-1B蛋白表达。取大网膜周围脂肪组织，以中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡
, 百拇医药
包埋、切片(厚度为5 μm)，3% H2O2室温孵育5～10min；5%～10%正常山羊血清封闭；滴加抗-α-PTP-1B抗体(一抗)，37℃恒温摇床中孵育1～2h；滴加FITC标记的羊抗兔IgG(二抗)，37℃恒温摇床中孵育10～30min；在荧光显微镜下用紫外光激发，观察标记效果；HPIAS-1000型全自动图像分析系统计算平均光密度值。Westernblotting测脂肪组织PTP-1B蛋白表达。取50g大网膜周围脂肪组织样本匀浆，电泳，转印到NC膜上，丽春红可逆染色；封闭2h；与一抗抗-α-PTP-1B多克隆抗体在4℃下孵育过夜；与辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1h；在检测试剂A和B(ECL试剂盒)的混合液中孵育约1 min；曝光、显影、洗像；与淬灭缓冲液孵育40 min，检测β-actin。, 百拇医药(杨化冰 吴 勇 徐丹林)