高效液相色谱法测定消渴胶囊中葛根素的含量
 |
 |
 |
 |
 |
收稿日期：2006-11-20
作者简介：王举涛(1977-)，男，讲师，研究方向为天然药物化学成分及质量标准E-mail: wjt591@163.com
摘要：目的用高效液相色谱法测定消渴胶囊中葛根素的含量。方法依利特C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相：乙腈-0.2%柠檬酸(12:88)，检测波长：250 nm，流速：1.0 mL/min；结果葛根素在20.72 ~124.32μg/mL范围内有良好的线性关系，r=0.999 9(n=5)，平均回收率为97.08%。结论此法分离度高，重现性好，简便，准确，可用于消渴胶囊的质量控制。
关键词：高效液相色谱；消渴胶囊；葛根素
中图分类号：O657.7+2文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)03-0017-3
Determination of Puerarin in Xiaoke Capsule by HPLC
WANG Ju-tao1,2,YE Jie-sheng2，YANG Kang-hui2, CHEN Ming1
(1. Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Hefei 230038, China; 2. School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012, China )
Abstract：Objective To determine the content of puerarin in Xiaoke Capsule by HPLC. Methods HPLC method was performed on Yilite C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) column with a mixture of acetonitrile-0.2%citric acid (12:88) as mobile phase. The detection wavelength was set at 250 nm and the flow rate was 1.0 mL/min. Results The standard curve was linear in the range of 20.72 ~124.32 μg/mL for puerarin (r=0.999 9, n=5). The average recovery was 97.08%. Conclusion The method is simple and accurate, and has a high resolution and good reproducibility for the quality control of Xiaoke Capsule.
Key words：HPLC; Xiaoke Capsule; puerarin
消渴胶囊是由葛根、地黄、黄芪、天花粉、玉米须、五味子、山药、格列本脲组成的中药复方制剂，具有滋肾养阴，益气生津之功效。临床用于治疗多饮，多尿，多食，消瘦，体倦无力，眠差腰痛，尿糖及血糖升高之气阴两虚型消渴症。
葛根具有发表解肌、升阳透疹、生津止渴之功效[1]，且在处方中的用量较大，可确保临床疗效。葛根素是葛根的主要有效成分之一[2,3]，用高效液相色谱法测定消渴胶囊中葛根素含量，具有快速、准确、专属性强、重现性好等特点，可用于消渴胶囊的质量控制。
1 仪器与试药
SPD-10ATVP高效液相色谱仪，SPD-10AVP型紫外检测器(日本岛津公司)； N2010色谱工作站(浙江大学)；D-2型电子天分析平(美国PE公司)；葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)，乙腈为色谱纯，其余试剂、试药均为分析纯，水为重蒸去离子水。
2方法与结果
2.1系统适用性
色谱柱：依利特C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：25 ℃，流动相：乙腈-0.2%柠檬酸(12∶88)；检测波长：250 nm；流速：1.0 mL/min。理论板数以葛根素计不低于3 000，分离度：R=1.62。阴性(不含葛根的消渴胶囊)对照溶液在与葛根素对照品相同保留时间处无干扰峰出现，故处方中其它味药对测定结果无影响，见图1。
2.2供试品溶液的制备
取本品1.0 g研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 w，频率50 kHz)30 min，放冷。用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤。精密量取续滤液1 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度即得。
时间/min
a
时间/min
b
时间/min
c
图 1 HPLC图谱
a.葛根素对照品溶液，b.供试品溶液，c.阴性对照溶液
2.3对照品溶液的制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的葛根素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含91μg的溶液即得。
2.4线性关系的考察
精密称取葛根素对照品5.18 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取贮备液1.0，2.0，4.0，5.0及6.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度(20.72~124.32μg/mL)的对照品溶液，精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(y)、葛根素浓度为横坐标(x)进行回归分析，得回归方程：
y=35 785x+10 566，(r=0.9999，n=5)。
2.5精密度实验
精密吸取葛根素对照品溶液20 μL，重复进样5次，测定葛根素峰面积值，RSD为0.52%(n=5)。
2.6稳定性实验
精密吸取供试品溶液20μL，每间隔2 h测定1次，结果显示8 h内，溶液中葛根素峰面积的RSD为1.12%(n=5)，稳定性较好。
2.7重现性实验
精密称取样品(批号：20060518)1.0 g，共5份，依法测定，葛根素平均含量为13.63 mg/g，RSD为1.35%，重现性较好。
2.8回收率实验
精密称取已知含量(13.63 mg/g)的同一批号样品约0.5 g，共6份，分别加入一定量的葛根素对照品溶液，按2.2所述方法配制供试品溶液。依法测定，平均回收率为97.08%，RSD为1.19% (n=5)，见表1。
表 1回收率实验结果
2.9样品测定
取不同批次的样品，依法测定，结果见表2
表 2样品含量测定结果
3讨论
3.1测定方法的选择
测定葛根素含量的方法有比色法、紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法[4-6]等，为了减少不同实验过程造成的误差，本实验选择高效液相色谱法测定葛根素含量，具有快速、准确、专属性强等特点。
3.2样品前处理方法的选择
考察提取溶媒、提取方法及提取时间对含量测定的影响，结果表明，以甲醇超声处理30 min为最佳。
3.3流动相的选择
考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-柠檬酸水等体系，结果表明，以乙腈-0.2%柠檬酸(12:88)为流动相时，葛根素的分离度和峰形最好。
参考文献
[1]潘燕，张岫美. 葛根素药理研究近况[J]. 食品与药品，2005，7(12)：10-12.
[2]郑锆，赵冉. 不同品种葛根产地及化学成分分析研究[J]. 中医药管理杂志，2006，14(4)：51-52.
[3]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版(一部)[M]. 北京：化学工业出版社. 2005：296.
[4]刘生杰，王丽娜，董圣惠. HPLC法测定葛根滴丸中葛根素的含量[J]. 药学实践杂志，2006，24(3)：164-166.
[5]梁文法. 紫外分光光度法测定葛根中葛根素含量[J]. 中成药，1991，13(12)：32.
[6]宋金荣. 薄层扫描法测定葛根芩连片中葛根素的含量[J]. 中国药业，2003，12(7)：35-36., 百拇医药(王举涛 叶杰胜 杨康辉 陈 明)