不同年龄大鼠脑中磷脂薄层扫描测定
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摘要：目的分析不同年龄大鼠脑中磷脂成分的变化。方法用改进的薄层层析法分离磷脂，薄层扫描法定量测定。结果改进后的层析法分离效果好，随着大鼠年龄的增长总磷脂与几种主要磷脂的量逐渐增多，占脑干重的百分比发生有规律的变化，PS/PE值逐渐减小。结论用此方法测定不同年龄大鼠脑中的磷脂成分的变化简便、准确。
关键词：鼠脑；磷脂；薄层扫描
中图分类号：Q545,O658.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)05-0011-04
Determination of Phospholipids from Rat Brains in Different Ages by TLCS
ZHANG Xin, LIU Dai-cheng*, LIU Shu-ming
(College of Life Science, Shandong Normal University, Jinan 250014, China)
Abstract：Objective To analysis the change of phospholipids in the rat brains of different ages. Methods The phospholipids were separated by improved TLC and determined by TLCS. Results TLC method improved the separation efficiency. Along with the increase of age, the gross and several major compositions of the phospholipids increased gradually, the percentage in total dry weight of brain varied regularly, and the ratio of PS and PE decreased. Conclusion TLCS method is simple, accurate and convenient for the determination of phospholipids from the rat brains of different ages.
Key Words：rat brain; phospholipids; thin layer chromatography scanning (TLCS)
磷脂(phospholipid)是构成所有生物膜的基本成分，以其特定的结构和性质保证细胞的正常结构和功能，如生长发育、细胞识别、细胞信息传递、能量转换和防御等[1]。磷脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、鞘磷脂(sphingomyelin，SPM)等成分。磷酯含量和结构的改变将导致酶活性、受体功能和膜通透性异常，从而影响机体的代谢和功能，大脑中各种磷脂成分之间比例的变化及磷脂分子所含脂肪酸种类的变化与脑功能有关，磷脂结构及其不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸比例的改变会导致某些疾病发生，如Down’s综合征就表现为前脑皮质PE减少，PS和SPM含量增加[2]；阿尔茨海默病(AD)患者脑组织中PE含量明显降低而PC含量几乎无改变，且PE分子中所有多不饱和脂肪酸种类比例均下降，所有饱和脂肪酸种类均增多[3]。因此，测定不同条件下脑磷脂含量的变化可对临床上治疗某些疾病予以理论指导，如在Down’s综合征和AD患者的患病初期予以含PE的药物或保健品可防止疾病恶化，目前市场上已有许多针对老年人的磷脂类保健产品。
薄层层析法(TLC)定性分离磷脂已有文献报道[4,5]，薄层扫描(thin layer chromatography scanning，TLCS)定量分析对TLC要求严格。研究适于定量测定动物脑磷脂的TLCS方法以探讨不同年龄动物脑磷脂的变化规律是极为必要的。
1材料与方法
1.1材料
Wistar大鼠44只由山东大学实验动物中心提供，其中孕17 d胎鼠12只，初生鼠8只，4 d鼠8只，1月鼠5只，3月鼠4只，7月鼠3只，18月鼠4只，剪下鼠头置入液氮速冻，取脑测定磷脂。
1.2主要仪器和试剂
1.2.1仪器CS-930型薄层扫描仪(日本岛津)；冷冻真空干燥机(日本Yamato)；薄层自动铺板器(重庆海岸实验电器厂)；旋转蒸发器(德国Heidolph)；磁力加热搅拌器(江苏国华仪器厂)；恒温干燥箱(张店电热仪器厂)。
1.2.2试剂氯仿、无水乙醇、三乙胺、氢氧化钠均为分析纯；溴百里香酚蓝(分析纯，天津科密欧化学试剂开发中心)；硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；磷脂标准品(Sigma)；自制去离子水。
1.3方法
1.3.1磷脂提取新鲜脑组织经冷冻干燥机-108 ℃干燥8 h，称重，加3倍体积的丙酮搅拌1 h，静置10 min，取滤渣，重复提取3次，滤渣真空干燥，冷却后称重，再加3倍体积的甲苯搅拌提取1 h，取滤液，重复提取3次，滤液55 ℃旋转蒸发得黄色固体状磷脂复合物，冷却后称干重，氯仿溶解后定容至500 mL ......
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