樟芝深层液体发酵条件的试验研究
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摘要：目的研究提高樟芝菌丝体干重和胞内外多糖产量的方法。方法用二次通用旋转组合设计法，研究樟芝液体发酵条件中的温度、转速和接种量对菌丝体干重和胞内外多糖产量的影响。结果与结论胞内多糖总产量的最优参数组合为温度27 ℃、转速113 r/min、接种量21 %；胞外多糖产量的最优参数组合为温度27 ℃、转速120 r/min、接种量22 %，并通过试验验证了最优组合。
关键词：樟芝；液体发酵；菌丝体；多糖
中图分类号：R977.6文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)09-0018-04
Experiment Study on Submerged Fermentation Condition of Antrodia Camphorata
ZHANG Hong-hai1, ZHANG Zhong-xin1, MA Hai-le2*
(1. Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003, China; 2. Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China)
Abstract：Objective To study the methods of increasing the dry mycelium weight and the yield of polysaccharide in intra-cell and extra-cell of Antrodia camphorata. Methods The influences of temperature, centrifugal speed and inoculation volume on dry mycelium weight and yield of polysaccharide were investigated in the submerged fermentation of Antrodia Camphorata by means of the method of quadratic general rotary unitized design. Results and Conclusion The optimal combination of parameters for the total yield of intracellular polysaccharide is regarded as temperature of 27 ℃, centrifugal speed of 113 r/min, inoculation volume of 21 % and that of extracellular polysaccharide is the temperature of 27 ℃, centrifugal speed of 120 r/min, inoculation volume of 22 %. The both of optimal combinations are validated.
Key words：Antrodia camphorata; liquid fermentation; mycelia; polysaccharide
樟芝(Antrodia camphorata)生长在中国台湾牛樟树的中空心木材内壁，故称为牛樟芝，也叫樟窟内菇，属担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，薄孔菌属[1,2]。樟芝具有保肝、解毒消肿、抗肿瘤、提高免疫力等功效，是一种珍稀名贵、有开发潜力和药用价值的真菌[3,4]。研究表明，樟芝多糖能提高免疫力和抑制肿瘤细胞增生，无副作用。为了提高樟芝发酵过程中胞内外多糖的产量，我们用二次通用旋转组合设计法[5,6]优化了影响樟芝菌丝体生长和胞内外多糖产量的发酵条件。
1材料与方法
1.1菌种
樟芝(上海农科院食用菌研究所提供)。
1.2培养基
1.2.1斜面培养基PDA培养基。
1.2.2液体种子培养基PDA液体培养基加入0.1 %KH2PO4和0.05 %MgSO4·H2O。
1.2.3液体发酵培养基玉米面5 %，麸皮0.6 %，维生素B1 0.012 %，KH2PO4 0.25 %，MgSO4·7H2O 0.05 %。
1.3培养方法
1.3.1液体种子的培养取斜面试管菌种接种于培养皿中，25 ℃培养20 d，菌丝体粗壮后，用直径8 mm无菌打孔器从平板上打孔取块，定量接种于含有100 mL培养基的250 mL三角瓶中，于25 ℃、130 r/min摇床上培养8 d。
1.3.2发酵培养250 mL三角瓶内装100 mL培养基，接种后在摇床上震荡培养。
1.4菌丝体干重测定、胞内外多糖提取和含量测定
1.4.1菌丝体干重测定发酵结束后，4 000 r/min离心15 min，沉淀后120目滤网过滤获菌丝体，用蒸馏水洗涤数次，50 ℃烘干至恒重，电子天平称量。
1.4.2胞内多糖测定研钵充分研磨干燥的菌丝体，过120目筛后，置于圆底烧瓶中，加20倍水，80 ℃水浴提取胞内多糖2次，每次1 h。然后用超声波提取，每次30 min，合并提取液，离心分离、过滤，除去滤渣，用硫酸-苯酚法测定多糖含量。
1.4.3胞外多糖测定取100 mL过滤后的发酵液 ......
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