一种新型凋亡素融合蛋白的克隆表达及活性测定

一种新型凋亡素融合蛋白的克隆表达及活性测定(1)

http://www.100md.com 2009年7月1日《食品与药品·A版》 2009年第7期

     摘要：目的克隆表达ECSOD3凋亡素融合蛋白，并检测其生物活性。方法PCR扩增出apoptin序列，与表达载体ECSOD3pET28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导，表达产物进行Ni2+NTA纯化和MTT活性检测。结果表达载体pET28aECSOD3apoptin经酶切鉴定和序列分析，证明质粒构建正确，转化E.coliBL21(DE3)后，重组蛋白获得表达，Ni2+NTA纯化后的凋亡素融合蛋白纯度达到85%以上，经噻唑蓝(MTT)法测定具有活性。结论成功构建了表达载体pET28aECSOD3apoptin，并在大肠杆菌中表达了ECSOD3凋亡素融合蛋白，纯化的蛋白质具有诱导HeLa细胞凋亡的能力。

    关键词：ECSOD3凋亡蛋白；克隆表达；纯化；噻唑蓝法

    中图分类号：Q591.2文献标识码：A文章编号：

    1672979X(2009)07000705

    凋亡素(apoptin/VP3)能特异性的诱导动物和人体肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有影响[13]，并且凋亡蛋白选择性诱导肿瘤细胞凋亡是非p53依赖途径[4，5]，这一特性有希望将凋亡蛋白开发成新一代治疗肿瘤的药物。目前开发重组凋亡素蛋白药物主要有两条途径：一是构建以反转录病毒为主要骨架的真核表达载体 ......

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