诱导时机对羧肽酶原B包涵体质量和复性率影响的研究(1)
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摘要：目的研究诱导时机对羧肽酶原B包涵体质量和复性率的影响，探讨包涵体质量评价体系。方法在不同时间诱导产生重组羧肽酶原B包涵体，研究其变性和复性、对蛋白酶K的稳定性及在一定浓度盐酸胍溶液中的化学变性，分析诱导时间与包涵体复性率的相关性。结果诱导时机不同，所得重组羧肽酶原B包涵体复性率及对蛋白酶K的稳定性不同，在一定浓度盐酸胍溶液中的溶解性也不同。复性率越高的包涵体越不易被蛋白酶K酶解，对化学变性剂的稳定性也高。结论诱导时机影响重组羧肽酶原B包涵体的质量及复性率。
关键词：羧肽酶B；诱导时机；包涵体；蛋白酶K
中图分类号：Q518.4文献标识码：A文章编号：
1672979X(2009)07001704
随着基因工程和蛋白质工程的发展，现已能按照需要设计和生产具有各种特殊用途的蛋白质。其中难题之一是基因工程产物往往以没有生物活性的包涵体(inclusionbodies，IBs)形式存在。已知70%以上的重组蛋白质在大肠杆菌中形成不溶的IBs，且大多数IBs蛋白质的复性率不超过10%，有的甚至完全不能复性。减少IBs的形成数量或者提高IBs的复性率是基因工程和蛋白质工程亟待解决的问题。
研究表明，以IBs形式表达的重组蛋白质未必完全失去活性[2]IBs蛋白质的重要特点是存在二级结构和有抵抗蛋白质水解的能力[3，4]。如可溶性和IBs形式的半乳糖苷酶的比活具有同样的数量级[1]；偶联了荧光蛋白的IBs荧光蛋白可发出高强度荧光 ......
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