对虾抗菌肽PEN-3和PEN-4嵌合基因在大肠杆菌中的表达及抗菌活性测定

http://www.100md.com 2009年9月1日 郝淼闻　范立强　刘　一　赵　健　李素霞　袁勤生

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     摘要：目的 表达融合2种具有对虾抗菌肽活性的新型抗菌肽。方法利用overlap-PCR连接并扩增对虾抗菌肽Penaeidin-3和Penaeidin-4的嵌合基因序列，定向插入原核表达载体pET_28a(+)中，构建此嵌合基因的表达质粒。将表达质粒转化至E.coli BL21(DE3)，经终浓度1.O mmol/L IPTG分别在37℃和15℃诱导表达4 h和14 h，SDS-PAGE分析嵌合蛋白质的表达，用抑菌圈法测定产物的抑菌活性。结果获得了含有Penaeidin-3和Penaeidin-4嵌合基因的表达质粒；18%SDS-PAGE电泳显示，大肠杆菌中表达的嵌合蛋白质相对分子质量约14.7×10³，主要以包涵体形式存在，包涵体15℃的表达量高于37℃的表达量；包涵体复性后，对枯草杆菌和溶藻弧菌具有明显的抑菌活性。结论实现了2种对虾抗菌肽嵌合基因在大肠杆菌中的表达。

    关键词：对虾抗菌肽；重叠PCR；嵌合基因；大肠杆菌；蛋白质表达

    http://www.100md.com/html/paper/1672-979X/2009/09/01.htm

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