大黄鱼类IV型抗冻蛋白基因的克隆、表达及功能研究
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摘要：目的 研究大黄鱼类Ⅳ型抗冻蛋白基因编码产物的功能。方法从大黄鱼肝脏SSH eDNA文库筛选到的类似极地鱼类IV型抗冻蛋白的EST序列出发，用RACE方法克隆IV型抗冻蛋白基因全长eDNA，RT-PCR分析此基因在大黄鱼不同组织内的表达。构建原核表达载体pGEX-4T-Lycafp并表达蛋白质，亲和层析纯化GST融合蛋白，分析它的体外细菌抗冻保护作用。结果大黄鱼类Ⅳ型抗冻蛋白基因eDNA全长664bp，包含372 bp开放阅读框，编码124个氨基酸，经SignalP3.0软件预测其N端前20位氨基酸为信号肽，氨基酸序列与长角杜夫鱼lV型抗冻蛋白同源性高达52%；RT-PCR分析表明其mRNA仅在肝脏表达；重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，初步纯化后分析体外细菌抗冻保护作用表明，融合蛋白抗冻活性并不明显。结论大黄鱼类Iv型抗冻蛋白不具有显著的抗冻活性，这与大黄鱼不能在低温下生存吻合。
关键词：鱼类IV型抗冻蛋白；RACE；抗冻活性；大黄鱼
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