摘要：目的提高重组黏质沙雷菌ECUl010脂肪酶(GST-lipase)可溶性表达量，研究其相关理化性质。方法PCR扩增lipase基因，与表达载体pGEX-4T-1连接后转入E.coli BL21(DE3)，优化培养提高可溶性表达量，表达产物用GST亲和层析柱纯化。研究温度、pH等对酶活性的影响，重组酶的底物特异性以及对(±)-MPGM的手性拆分。结果优化后可溶性酶的活性可达8612.3U/L，纯化9.8倍后比活性为3.3U/mg。重组脂肪酶的最适反应温度为30℃，最适pH为9.0。温度低于30℃、pH 6.0～6.8的条件下比较稳定。Ca²⁺，Fe²⁺等金属离子和一些非离子表面活性剂能提高酶的活性。硝基苯月桂酸酯(C₁₂)是其最适底物。以(±)-MPGM为底物，4h后转化率达到47.3%，ee值为89.7%。结论优化后可溶性脂肪酶的活性大大提高，研究了重组脂肪酶的相关性质，为地尔硫革的工业化生产奠定了基础。

    关键词：黏质沙雷菌ECU1010；脂肪酶；可溶性表达；纯化；性质；手性拆分

    中图分类号：Q556

    文献标识码：A

    文章编号：1672-979X(2010)03-00077-06

    脂肪酶(EC 3.1.1.3)又称三酰基甘油酯水解酶(triacylglycerol acylhydrolase) ......