药品微生物限度检查验证方法在保健品中的应用研究(2)
大肠菌群、沙门菌阴性对照菌，取大肠埃希菌作为金黄色葡萄球菌的阴性对照菌。分别加至含规定量样品的增菌培养管中，与阳性对照组同步实验，观察试验菌的生长，以验证方法的专属性。
2.5.3 样品对照组按标准方法检验样品，结果见表3。
3 结果
3.1 茵液计数
见表1～3。
由表3可见，检查细菌、酵母菌及霉菌时，维生素E胶囊采用常规法，各实验菌平均回收率均达到70%；芦荟胶囊常规法枯草芽孢杆菌试验回收率低于70%，大蒜素胶囊只有用薄膜过滤法时，各试验菌平均回收率全部达到70%。试验回收率低于70%，表明该样品有抑菌性，即使样品中有菌存在亦易造成漏检，应使用有效方法去除抑菌活性。
由5株验证菌回收率的结果可见，枯草芽孢杆菌平均回收率低于其它菌。证明对样品的抑菌作用有高度灵敏性，日常实验时，可优先使用枯草芽孢杆菌验证试验方法。
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3.2 控制菌检查验证结果
由表4可见，3种样品阳性菌对照组检出阳性菌，阴性菌对照组未检出。3种样品均可用常规法检验，供试品无需特殊处理。
4 讨论
4.1 检查方法的选用
细菌、酵母菌及霉菌检查方法主要有常规法(1mL/皿)、培养基稀释法(0.5mL/0.2mL/皿)、薄膜过滤法，此三种方法依次适于检验无抑菌作用、有弱抑菌作用以及强抑菌性的样品。本实验中3种保健品几乎对霉菌无抑制作用，酵母菌及霉菌均可用常规法检验。维生素E胶囊对3株验证菌均无抑制作用，可用常规法检查细菌总数；芦荟胶囊对枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用，可用培养基稀释法(0.2mL/皿)检查；大蒜素胶囊对细菌有很强的抑制作用，需用薄膜过滤法(200mL/膜)检查。3种保健品的大肠菌群、金黄色球菌和沙门菌检查均可用常规法检验。
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4.2 验证实验的重要性
本验证实验表明，芦荟有弱抑菌性，大蒜素胶囊有较强抑菌性，样品中污染的细菌因受样品抑制而不生长，用常规法检验易造成漏检。文献报道，保健品微生物污染问题突出，占10%。现行保健品标准只要求将1:10供试液10倍稀释到一定级别再用平皿计数，不强调稀释到哪一级，也不要求验证。如果按1:10供试液检验容易造成漏检；若行多步稀释，一是误差大，二是稀释到哪一步较适宜没有依据。
4.3 建议
保健品现行标准不要求方法验证。保健食品微生物检查相关项目的方法与药品检查法大致相同，即常规法、稀释法和薄膜过滤法。而保健品因成分不同而抑菌程度不同，即使样品无抑菌作用，其前期污染的微生物在生产过程中可能受到一定程度损伤，常规法难以检出，若给予适当的条件则能修复或复苏。故应采取适当方法处理样品并验证方法的合理性。建议检验样品时先用微生物学检验方法验证，以消除供试品抑菌性，建立合理的检验方法，保证保健品的质量。
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样品检验时可凭经验判断其抑菌性大小，优先选择常规法验证，因为该法简单易行。培养基稀释法工作量大，薄膜过滤法则相对成本稍高。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部，GB，r4789-2003食品卫生微生学检验[s]2003。1-31.
[2]中国药典2005年版(一部)[s]，附录xⅢc.
[3]特玉香，王文捷，祈文娟，等，保健(功能)食品卫生微生物学检验方法的探讨[J]，中国药事，2008，22(7)：594-597，[4]特玉香，古丽巴哈尔扎乎提，杨洪淼，等，保健食品微生物限度检查的方法学验证[J]，药物分析杂志，2008，28(2)：270-274.
[5]马绪荣，苏德模，药品微生物学检验手册[M]，北京：科学出版社，2000：52., 百拇医药(高新贞 陈 静 白秀萍)
2.5.3 样品对照组按标准方法检验样品，结果见表3。
3 结果
3.1 茵液计数
见表1～3。
由表3可见，检查细菌、酵母菌及霉菌时，维生素E胶囊采用常规法，各实验菌平均回收率均达到70%；芦荟胶囊常规法枯草芽孢杆菌试验回收率低于70%，大蒜素胶囊只有用薄膜过滤法时，各试验菌平均回收率全部达到70%。试验回收率低于70%，表明该样品有抑菌性，即使样品中有菌存在亦易造成漏检，应使用有效方法去除抑菌活性。
由5株验证菌回收率的结果可见，枯草芽孢杆菌平均回收率低于其它菌。证明对样品的抑菌作用有高度灵敏性，日常实验时，可优先使用枯草芽孢杆菌验证试验方法。
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3.2 控制菌检查验证结果
由表4可见，3种样品阳性菌对照组检出阳性菌，阴性菌对照组未检出。3种样品均可用常规法检验，供试品无需特殊处理。
4 讨论
4.1 检查方法的选用
细菌、酵母菌及霉菌检查方法主要有常规法(1mL/皿)、培养基稀释法(0.5mL/0.2mL/皿)、薄膜过滤法，此三种方法依次适于检验无抑菌作用、有弱抑菌作用以及强抑菌性的样品。本实验中3种保健品几乎对霉菌无抑制作用，酵母菌及霉菌均可用常规法检验。维生素E胶囊对3株验证菌均无抑制作用，可用常规法检查细菌总数；芦荟胶囊对枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用，可用培养基稀释法(0.2mL/皿)检查；大蒜素胶囊对细菌有很强的抑制作用，需用薄膜过滤法(200mL/膜)检查。3种保健品的大肠菌群、金黄色球菌和沙门菌检查均可用常规法检验。
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4.2 验证实验的重要性
本验证实验表明，芦荟有弱抑菌性，大蒜素胶囊有较强抑菌性，样品中污染的细菌因受样品抑制而不生长，用常规法检验易造成漏检。文献报道，保健品微生物污染问题突出，占10%。现行保健品标准只要求将1:10供试液10倍稀释到一定级别再用平皿计数，不强调稀释到哪一级，也不要求验证。如果按1:10供试液检验容易造成漏检；若行多步稀释，一是误差大，二是稀释到哪一步较适宜没有依据。
4.3 建议
保健品现行标准不要求方法验证。保健食品微生物检查相关项目的方法与药品检查法大致相同，即常规法、稀释法和薄膜过滤法。而保健品因成分不同而抑菌程度不同，即使样品无抑菌作用，其前期污染的微生物在生产过程中可能受到一定程度损伤，常规法难以检出，若给予适当的条件则能修复或复苏。故应采取适当方法处理样品并验证方法的合理性。建议检验样品时先用微生物学检验方法验证，以消除供试品抑菌性，建立合理的检验方法，保证保健品的质量。
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样品检验时可凭经验判断其抑菌性大小，优先选择常规法验证，因为该法简单易行。培养基稀释法工作量大，薄膜过滤法则相对成本稍高。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部，GB，r4789-2003食品卫生微生学检验[s]2003。1-31.
[2]中国药典2005年版(一部)[s]，附录xⅢc.
[3]特玉香，王文捷，祈文娟，等，保健(功能)食品卫生微生物学检验方法的探讨[J]，中国药事，2008，22(7)：594-597，[4]特玉香，古丽巴哈尔扎乎提，杨洪淼，等，保健食品微生物限度检查的方法学验证[J]，药物分析杂志，2008，28(2)：270-274.
[5]马绪荣，苏德模，药品微生物学检验手册[M]，北京：科学出版社，2000：52., 百拇医药(高新贞 陈 静 白秀萍)