表达藤黄微球菌过氧化氢酶基因的工程大肠杆菌发酵条件优化
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摘要：目的优化表达重组藤黄微球菌(M.luteus)过氧化氢酶基因工程菌的发酵条件。方法以生物量和目标蛋白表达量为判断标准，利用单因子试验和正交试验在摇瓶水平优化初始pH、IPTG浓度、诱导时机、诱导时间等影响工程菌发酵制备藤黄微球菌过氧化氢酶的发酵条件。结果最佳发酵工艺参数：培养基初始pH6.5，摇床转速180r/min，装液量75mL，接种量6%，培养温度37℃，诱导表达时间5h。蛋白表达量比优化前提高近30%，重组蛋白经Ni-NTA纯化和透析后，酶活性为166.0U/(mg.protein)，以实验条件相同野生菌酶活100.0U/(mg.protein)为对照，重组酶的酶活性提高66%。结论工艺优化后，酶表达量及酶活性均显著提高。
关键词：过氧化氢酶；融合表达；Ni-NTA亲合层析；发酵工艺
中图分类号：Q.78 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2012)05-0153-06
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