利用寡核苷酸芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药ｒｐｏＢ基因突变
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李召东 陈瑜 王明法 胡旭 李凫坚 严杰 程建玲 浙江大学医学院 杭州红十字会医院
【摘要】目的:开发快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB寡核苷酸突变的基因芯片。方法:根据结核杆菌rpoB基因序列设计探针和引物并制备基因芯片,从临床痰标本中提取结核菌的基因组DNA,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上的特异性寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较。结果:22株临床痰标本有18株可用寡核苷酸芯片检测出来,正确率可达82%;患者痰液中少量DNA足够进行芯片检测,无须细菌培养。结论:利用寡核苷酸芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的准确性和敏感性,可以应用于临床耐药性诊断。
【关键词】 结核分枝杆菌 rpoB基因 利福平耐药 寡核苷酸芯片
【基金】浙江省医药卫生科技基金项目(2003B136)
【分类号】R450
结核病作为最常见的传染性疾病之一,全世界约5亿人感染结核杆菌。在我国,约3000万人有结核杆菌感染,其中近150万人具有传染性,每年死于结核病的患者高达13万。近年来,随着人口流动的增加、诊断治疗的延误、抗结核药物的滥用等原因导致耐药菌株的增加,已形成耐多药结核病,是结
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[摘要]目的：开发快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB寡核苷酸突变的基因芯片。方法：根据结核杆菌rpoB基因序列设计探针和引物开制备基因芯片，从临床痰标本中提取结核菌的基因组DNA，PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段，荧光标记后与芯片上的特异性寡核苷酸探针进行杂交，同时与DNA测序法比较。结果：22株临床痰标本有18株可用寡核苷酸芯片检测出来，正确率可达82%；患者痰液中少量DNA足够进行芯片检测，无须细菌培养。结论：利用寡核苷酸芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的准确性和敏感性，可以应用于临床耐药性诊断。
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