ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ假阳性20例分析
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[摘要]目的：分析行HBsAg检查时出现假阳性结果的原因。方法：用ELISA法检测HBsAg。结果：不同厂家及同一厂家不同批号的试剂、标本处理、溶血、加样时间、洗板不当、显色等因素都影响HBsAg的检测结果。结论：用ELISA法检测HBsAg首选灵敏度适中合格的试剂盒，其次标本处理应得当，加样时间适中，严格每一步操作。
[关键词]HBsAg；假阳性；ELISA法
[中图分类号]R446[文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2007)05(b)-096-01
在发出HBsAg检验报告后，有时出现上下两次检验结果不符，甚至出现阴、阳性完全相反的两种结果，难以向病人解释。为探其原因，我们对2005年3月~2006年12月出现的20例HBsAg二次结果完全相反的标本进行了原因分析，现报道如下：
1 材料和方法
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1.1 试剂
HBsAg试剂盒选用卫生部药品生物制品鉴定所批检合格的产品，初检用厦门新创科技有限公司生产的试剂，复检用北京万泰生物药业有限公司生产的试剂和郑州博赛生物技术有限公司生产的一次性试纸条。每批试剂使用前用1 μg/L、2 μg/L定值血清测定其灵敏度，达到要求用10 000 μg/L定值血清控制hook效应防止定值标本的漏检，鉴定合格后使用。
1.2 定值血清
1 μg/L 、2 μg/L、10 000 μg/L定值血清由卫生部临检中心提供。
1.3 仪器
DNX-9620洗板机、DNM-9602酶标仪，均为北京普朗新技术有限公司生产。
1.4 方法
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严格按照试剂说明书进行操作，每块板设空白1孔， 1 μg/L 、2 μg/L定值血清各1孔，阴、阳性对照血清各2孔。用洗板机洗涤，酶标仪双波长450/655 nm测定各孔OD值，按试剂盒说明书计算Cutoff值。
1.5 结果报告
每块板上所做的质控血清、阴、阳性对照血清均在控制范围，对所有HBsAg阳性标本都进行复查。初检与复检2次HBsAg结果均为阳性者才判为阳性；复检HBsAg阴性者用郑州博赛技术有限公司生产的一次性试纸条核实，HBsAg仍为阴性者，判为阴性。
2 结果
20例HBsAg初检假阳性原因详见表1。
3 讨论
3.1 HBsAg假阳性的原因
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①试剂盒的因素：首先要选择检验合格、灵敏度适中的试剂盒。通过检测分析，我们发现厦门新创试剂OD值较高。 1 μg/L、2 μg/L定值血清对照结果提示厦门新创试剂灵敏度高于北京万泰试剂。20例中有3例因试剂盒问题初检为阳性，复检后为阴性，假阳性率占总阳性率15%。②溶血标本的影响：溶血后，血清具有过氧化物酶活性，同辣根过氧化物酶作用相似，能与聚乙烯孔内预包被的抗原或抗体结合，由于洗涤不完全，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显色，使HBsAg产生假阳性。③标本离心：标本离心不完全，血液未完全凝固或血清未完全析出就加入标本进行检测，致使检测反应孔出现凝血现象或残留细胞成分干扰，导致HBsAg出现假阳性，因为纤维蛋白细丝或残留细胞成分都会较牢固地吸附在包被孔内，如果未被洗掉，这些成分中的亚铁血红素，有类似过氧化物酶的结构，它能将底物中的过氧化氢氧化释放出新生态氧，将显色液中的四甲基联苯胺氧化成兰色的邻甲偶氮苯，造成HBsAg出现假阳性。④加样时间的影响：前后标本加样间隔时间过长，特别是夏天温度高，对HBsAg检验结果影响较大。⑤洗板影响：洗涤液浓度不合适，蒸馏水不合格，洗板机堵孔，残留液较多等产生的HBsAg假阳性。⑥显色：温度和时间对显色非常重要，温度37℃时，时间与显色的颜色深浅成正比。⑦操作不当与其他：加样量不准确，标本未加入包被孔底部，标本污染等原因。
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3.2 体会
ELISA法检测HBsAg虽操作简便，但试剂质量的差异、标本处理是否得当、加样是否准确规范、洗涤是否完全等因素对HBsAg的检验结果影响很大，要作好此项检验，须注意以下几点：①选择卫生部批批检合格的试剂盒；②空腹采血，无溶血，血清分离完全，避免纤维蛋白丝混入，加样一定要加到孔的底部；③严格按照说明书进行操作；④水浴箱温度保持在37℃，显色时间到再加终止液；⑤坚持室内质控和阴、阳性对照同时做，HBsAg弱阳性标本一定要进行复查，并选用不同厂家、不同批号的试剂复检，这样才能保证检验结果的准确性，降低HBsAg假阳性出现的几率。
[参考文献]
[1]刘思寨.ELISA法检测HBsAg影响因素的探讨[J].现代预防医学,2004，31(6)：882.
[2]周红妹,黄小虎.ELISA法检测HBsAg影响因素分析[J].中国热带医学,2006,6(10)：1867.
(收稿日期：2007-03-03), 百拇医药(田怀良)