益肾复方对实验性大鼠肾病的保护机制
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[摘要]目的：研究益肾复方对实验性大鼠肾病的保护机制。方法：采用静脉注射阿霉素(5.0 mg/ml)造成大鼠实验性肾病模型，观察益肾复方灌胃给药(ig)6周后对肾病大鼠尿蛋白、血液生化学指标及血清丙二醛(MDA)含量的影响；采用制备大鼠急性血瘀模型的方法，观察益肾复方对血液流变学各项指标的影响。结果：益肾复方(30，60 g·kg-1)在升高肾病大鼠总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量，降低肾病大鼠尿蛋白、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TCH)含量的同时，能降低血清丙二醛(MDA)含量。益肾复方60 g·kg-1可降低血瘀大鼠全血粘度(切变率5/s和1/s)、全血低切相对粘度、低切还原粘度、红细胞聚集指数。结论：益肾复方对实验性大鼠肾病具有保护作用，其机制可能与改善血液流变学和清除自由基有关。
[关键词]益肾复方；肾病；作用机制；血液流变学；丙二醛
[中图分类号]R364 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2007)06(b)-131-02
益肾复方是根据老中医多年临床经验方，采用现代中药技术研制而成，具有补脾肾、活血化瘀、清热利湿等作用。我们在以往的实验中，观察到益肾复方对阿霉素肾病具有良好的保护作用，在此基础上，我们进一步研究其作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物SD大鼠，雄性，体重250～300 g，由安徽医科大学实验动物中心提供，合格证号：皖医实动准01号。
1.1.2 药品与试剂①益肾复方浸膏，由合肥紫金医药科技有限公司提供，批号：20050326。②注射用多柔比星(阿霉素)，法玛西尼公司生产，批号：04-04-030，每支10 mg，临用前用生理盐水配制。③盐酸肾上腺素注射液：上海禾丰制药有限公司生产，批号：20041031。④丙二醛试剂盒，南京建成生物工程研究所生产。
1.1.3 仪器①7050c日立全自动生化分析仪，日本生产。②R80-锥板型血粘度仪，北京中勤世帝公司产品。
1.2 方法
1.2.1 对阿霉素肾病大鼠血液生化学指标和丙二醛含量的影响取雄性SD大鼠40只，随机分为5组，即对照组、肾病模型组、益肾复方三个剂量组(15，30，60 g·kg-1)，每组8只。对照组大鼠尾静脉注射等容量生理盐水，其它组分别尾静脉注射注射用多柔比星5.0 mg·kg-1，造模2周后测定尿蛋白确定造模成功。各组动物ig给药，连续6周，对照组和肾病模型组大鼠给予等容量蒸馏水灌胃。试验结束时，留取24 h尿测定尿蛋白量，剖杀大鼠，腹主动脉取血并分离血清，全自动生化分析仪上测定总蛋白 (TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)含量，此外测定血清丙二醛(MDA)含量。
1.2.2 对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响取SD大鼠40只，♀♂各半，随机分为5组，即对照组、血瘀模型组、益肾复方三个剂量组(15，30，60 g·kg-1)，每组8只。对照组和血瘀模型对照组大鼠灌胃蒸馏水，用药组大鼠给予相应药物灌胃，连续28 d，于灌胃第27 d时，除对照组外，其余各组大鼠均皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.7 mg/kg，共2次，2次间隔4 h，在2次之间(前后各间隔2 h)，将大鼠浸于0～2℃冰水中5 min，处置后停食18 h，次日最后一次灌胃1 h后腹主动脉取血，检测血液流变学指标(全血粘度，全血高切、低切还原粘度，全血高切、低切相对粘度，血浆粘度，压积，红细胞刚性指数，红细胞聚集指数，红细胞变形指数)。
1.3 统计学处理
所有数据用x±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 对阿霉素肾病大鼠丙二醛含量的影响
与对照组比较，肾病模型组大鼠血清总蛋白、白蛋白含量降低，尿素氮、甘油三酯和总胆固醇含量升高，有显著性差异。治疗6周后，益肾复方中、大剂量组(30，60 g·kg-1)可明显降低肾病大鼠尿蛋白含量和尿素氮、甘油三酯和总胆固醇含量，升高总蛋白和白蛋白含量，并降低肾病大鼠血清MDA含量，结果见表1。
2.2 对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响
与对照组比较，血瘀模型组血液流变学指标发生明显变化，全血粘度、血浆粘度、全血高切和低切还原粘度、全血高切和低切相对粘度、红细胞聚集指数均升高；益肾复方小、中剂量组上述指标有下降趋势，但无统计学差别；益肾复方大剂量组可明显降低血瘀模型组大鼠全血低切粘度(切变率5/s和1/s)，全血低切相对粘度、低切还原粘度、红细胞聚集指数(P<0.05)，显示益肾复方大剂量组具有改善血瘀大鼠血液流变学作用，结果见表2，3。
3 讨论
肾病病程一般较长，气阴两虚、湿热瘀阻是肾病的病机关键。在肾病发病过程中，持续大量蛋白尿，长期应用肾上腺皮质激素，均可刺激血小板增生，增加凝血因子活性，同时降低肝素的释放；低蛋白血症使血浆中胶体渗透压下降，引起血容量下降、血液浓缩；此外，高度浮肿时应用利尿剂亦可加重血液浓缩，促进血栓形成。肾内凝血可进一步使肾小球病发展、恶化[1]。此外，凡能进行有氧代谢的细胞大多均能产生自由基。肾脏同样是氧代谢器官，因此，肾脏也在不断产生少量自由基，但在正常情况下，自由基并不致病，这是因为在肾脏组织中存在着抗氧化机制。人们发现肾组织中富含超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH-X)等抗氧化酶，它们能够清除体内的自由基，从而保护肾组织不受自由基的损伤。在正常情况下肾脏的这种抗氧化能力与不断产生的氧自由基的氧化能力保持着相对的动态平衡，不会引起组织细胞的损伤。如果氧自由基的产生异常增多，或肾脏的抗氧化能力下降，就将导致肾组织的损伤，肾小球结构卤化、内皮细胞肿胀、上皮细胞损伤[2]。这些均类似中医气虚血瘀状态。
益肾复方主要由生黄芪、太子参、山药、山萸肉、当归、丹参、川芎、熟地、茯苓、白术、甘草等组成。我们在阿霉素肾病模型中已看见，益肾复方可提高肾病大鼠的血清总蛋白和白蛋白含量，降低尿蛋白、异常血脂和胆固醇水平，从而证实益肾复方对大鼠阿霉素肾病具有一定的保护作用。本实验从改善血液的高凝状态和清除自由基角度来探讨其机制。结果显示，益肾复方大剂量组具有改善血瘀大鼠血液流变学和降低MDA水平作用。现代药理学亦证明[3~7]，黄芪除具有消除尿蛋白和调节机体免疫力作用外，还可降低血小板活化程度，改善高凝状态，且其活性提取成分具有较强的抗氧化作用。川芎为血中气药，活血化瘀，行气止痛，能提高血小板中cAMP含量，降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，其提取物有抗氧化作用。丹参性微寒，养血活血化瘀，可以抗血栓形成、改善血液流变学、改善微循环，亦有清除自由基、抗氧化作用。因此，我们推测益肾复方抗实验性大鼠肾病的机制与改善血液的高凝状态和清除氧自由基有关，其他的机制我们将进一步研究。
[参考文献]
[1]张国华.肾病综合征高凝倾向及其防治[J].国外医学内科学分册，1997，24(3)：373.
[2]袁焕发.氧自由基与肾脏疾病[J] ......
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