p73蛋白在肺鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系
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[摘要]目的：检测p73蛋白在肺鳞癌组织中的表达情况，并探讨p73 蛋白的表达与肺鳞癌临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学法检测p73蛋白在56例肺鳞癌及癌旁组织中的表达情况。结果：p73蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率为73.2%(41/56)，而在癌旁肺组织中的阳性表达率为32.1%(18/56)，两者比较有显著性差异(P<0.01)。p73蛋白的表达与肺磷癌分化程度密切相关(P<0.05)，其在低分化鳞癌组织中的阳性表达率(94.4%)显著高于在高分化癌组织中的阳性表达率(40.0%)。p73 蛋白的表达与肺磷癌的TNM分期、淋巴结转移均无明显相关性( P>0.05)。结论：p73蛋白在肺磷癌组织中呈高表达，可能参与肺鳞癌的发生与发展。
[关键词]肺肿瘤；鳞状细胞癌；p73蛋白
[中图分类号]R734 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2007)06(b)-135-02
p73基因是抑癌基因p53家族成员之一，由Kaghad[1]等于1997年发现。由于其具有和p53相似的结构及诱导凋亡、活化转录、调控细胞周期等活性，因此该基因被发现后倍受关注。本实验采用免疫组织化学检测技术检测56例人肺鳞癌及癌旁肺组织中p73蛋白的表达，旨在探讨p73蛋白在肺鳞癌发生、发展中的意义及与肺鳞癌临床病理特征的关系。
1 材料和方法
1.1 样本
收集泸州医学院附属医院2005年1月～2006年6月住院手术切除的肺癌病理科存档的石蜡标本56例，所有病例均经病理组织学证明为鳞状上皮细胞癌。其中男42例，女14例；年龄35～69岁，平均年龄为59.2岁。分化程度：高分化15例，中分化23例，低分化18例。按1997年国际抗癌联盟(UICC) 修订的肺癌分期标准进行分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期29例，Ⅲ期20例。伴胸内淋巴结转移19例，无淋巴结转移37例。另外取癌旁肺组织(距癌肿5 cm)作对照分析。所有患者术前均未进行化疗和放疗，所有标本均经过10%福尔马林中性溶液浸泡，常规脱水、透明、侵蜡，然后石蜡包埋。
1.2 试剂
鼠抗人p73多克隆抗体和免疫组织化学试剂盒均购于上海晶美生物技术有限公司。
1.3 方法
采用免疫组织化学SP法染色，基本步骤严格按试剂盒说明书进行。用已知的食管癌阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判定标准
p73以细胞核显示棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。选取5个不同高倍视野(×100) ，计算阳性细胞占肿瘤细胞的百分率。阴性(-)：阳性细胞数<10%；阳性(+)：阳性细胞数≥10 %。由两名经验丰富的病理科医生进行盲法判读。
1.5 统计学处理
数据分析采用确切概率法(Fisher's Exact Test)或χ2检验，应用统计软件SPSS11.5进行分析，以P<0.05为具有统计学意义。
2 结果
2.1 p73在肺鳞癌和正常肺组织中的表达
p73阳性染色定位于细胞核。56例肺鳞癌中41例呈阳性表达，阳性率为73.2%，癌旁肺组织中有18例呈阳性表达，阳性率为32.1%，两者差异有显著性(P<0.01)。
2.2 p73表达与肺鳞癌临床病理特征的关系
p73表达阳性率与肺鳞癌分化程度有关，分化程度越低，p73表达阳性率越高(χ2＝12.874，P<0.01)。虽然p73的表达阳性率与年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期无明显相关性(P>0.05)，但有淋巴结转移者比无淋巴结转移者阳性率高，TNM Ⅲ期阳性率比TNMⅠ、Ⅱ期高(表1)。
3 讨论
p73基因和p53基因在结构和功能上有高度的同源性。p73基因定位于人染色体1p36.33，此区是多种人类肿瘤如恶性黑色素瘤、神经母细胞瘤、肝细胞癌、结肠癌、乳腺癌发生缺失或杂合性丢失的热点区，提示p73基因似乎是一个新的抑癌基因[2]。进一步研究发现，p73基因敲除小鼠存在严重的脑和免疫系统发育异常，没有肿瘤易感现象发生，而p53基因敲除小鼠则易患肿瘤，发育并无明显异常。p73在多种肿瘤如肺癌、膀胱癌等呈双等位基因表达，突变率也低[3,4]，而p53在肿瘤中的突变率较高，说明两者活化调节机制可能完全不同。p73在肿瘤发生、发展中的作用机制还有待进一步研究。
本研究结果显示，肺磷癌组织中p73蛋白呈高表达，阳性率为73.2% ，癌旁肺组织中表达率仅为32.1%，两者阳性表达率有显著性差异(P<0.01)。进一步观察发现，p73 蛋白阳性表达率与肺磷癌分化程度密切相关，其在低分化、中分化、高分化磷癌中阳性率分别为94.4%、78.3%、40.0%，有显著性差异(P<0.05)。另外，随着肺磷癌侵袭性增加(淋巴结转移、TNM Ⅲ期)，p73蛋白阳性表达率也有所增高。这表明肺鳞癌组织中确实存在p73蛋白，p73基因可能参与调控肺鳞癌的发生、发展，与张爱华、陈洪雷等[5，6]研究结果一致。
研究发现，p73蛋白能以p53蛋白同样的方式激活p53靶基因，抑制细胞生长，诱导细胞凋亡，p73基因是单等位基因表达，只有母本等位基因表达，父本等位基因为沉默基因[1]。与p53基因高突变不同，p73基因很少突变，因此可认为野生型p73蛋白过表达是因为沉默等位基因被激活，在肿瘤的发生、发展中起重要作用[1]，但其分子作用机理还不明确。目前，p73与肺鳞癌发生、发展的研究国内外都较少，本研究结果有助于进一步探讨p73在肺鳞癌发生发展中的分子作用机理。
[参考文献]
[1]Kaghad M, Bonnet H, Yang A, et al. Monoallelically expressed gene related to p53 at 1p36, a region frequently deleted in neuroblastoma and other human cancers[J] ......
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