牛磺酸抑制肾性高血压大鼠心肌细胞凋亡的研究(2)
1.2.2 实验分组75只大鼠随机分为3组：①模型组(n=30)：制备肾血管性高血压模型，于术后4周末及12周末各麻醉处死15只。②假手术组(n=30)：手术操作除左肾动脉不安置银夹外，余同模型组，于术后4周末及12周末各麻醉处死15只。③给药组(n=15)：确定模型成功者，于术后4周末开始灌饲牛磺酸50 mg/(kg·d)8周，以5 m1/(kg·d)的容量给药，给药8周后麻醉处死。相应假手术组、模型组灌以同等容积生理盐水。
1.2.3心肌AngⅡ含量测定取定量左室心肌，称重后加入0.5 mol/L乙酸5 m1,煮沸15 min，冷却后冰上匀浆，离心(3 000 r/min,20 min)，取上清液置-30℃低温冰箱保存，AngⅡ含量测定采用放射免疫法，药盒购自北京北方免疫试剂研究所，按说明书操作，所有测量配副管。
1.2.4 心肌细胞凋亡检测采用TDT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)对凋亡细胞进行原位检测，主要流程是:石蜡切片脱蜡，梯度酒精逐步水化，20 μg/L蛋白酶K 37℃消化15 min，3 g/lH2O2：水溶液灭活内源性过氧化物酶，磷酸缓冲液洗，加末端转移酶与荧光标记的核甘酸反应混合液(37℃, lh),磷酸缓冲液(PBS)洗;加过氧化酶标记的抗荧光抗体(37℃,30 min),磷酸缓冲液洗，DAB(3.3-diaminobenzidine，3.3-二氨基联苯胺)显色，苏木素核复染，脱水透明封片检测。阴性对照的反应混合液中不加末端转移酶，阳性对照用已知阳性片，以胞核着棕黄色为阳性，用计算计图像分析系统分析，每组随机取4、5张切片，每张切片随机取10个视野，至少计数1 000个细胞，以细胞阳性染色的平均光密度值(OD值)表示凋亡指数(apoptotic index, AI)。
1.2.5 左室心肌DNA含量的测定取定量左室心肌称重，其总DNA提取测定采用苯酚氯仿法[6]，DNA浓度测定应用分光光度计法。心室肌总DNA含量用DNA含量(μg)/心室肌重(mg)表示。
1.3 统计学分析
所有数据均以(x±s)表示，采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，两组间比较用t检验，P, 百拇医药(高明灿 严晓红 李志毅)
1.2.3心肌AngⅡ含量测定取定量左室心肌，称重后加入0.5 mol/L乙酸5 m1,煮沸15 min，冷却后冰上匀浆，离心(3 000 r/min,20 min)，取上清液置-30℃低温冰箱保存，AngⅡ含量测定采用放射免疫法，药盒购自北京北方免疫试剂研究所，按说明书操作，所有测量配副管。
1.2.4 心肌细胞凋亡检测采用TDT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)对凋亡细胞进行原位检测，主要流程是:石蜡切片脱蜡，梯度酒精逐步水化，20 μg/L蛋白酶K 37℃消化15 min，3 g/lH2O2：水溶液灭活内源性过氧化物酶，磷酸缓冲液洗，加末端转移酶与荧光标记的核甘酸反应混合液(37℃, lh),磷酸缓冲液(PBS)洗;加过氧化酶标记的抗荧光抗体(37℃,30 min),磷酸缓冲液洗，DAB(3.3-diaminobenzidine，3.3-二氨基联苯胺)显色，苏木素核复染，脱水透明封片检测。阴性对照的反应混合液中不加末端转移酶，阳性对照用已知阳性片，以胞核着棕黄色为阳性，用计算计图像分析系统分析，每组随机取4、5张切片，每张切片随机取10个视野，至少计数1 000个细胞，以细胞阳性染色的平均光密度值(OD值)表示凋亡指数(apoptotic index, AI)。
1.2.5 左室心肌DNA含量的测定取定量左室心肌称重，其总DNA提取测定采用苯酚氯仿法[6]，DNA浓度测定应用分光光度计法。心室肌总DNA含量用DNA含量(μg)/心室肌重(mg)表示。
1.3 统计学分析
所有数据均以(x±s)表示，采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，两组间比较用t检验，P, 百拇医药(高明灿 严晓红 李志毅)