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编号:11499501
脐血单个核细胞体外定向分化为神经干细胞及其致瘤性的实验研究(2)
http://www.100md.com 2007年9月15日 《中国医药导报》 2007年第26期
     特异性上下游引物各0.5μl。内对照GAPDH上下游引物各0.5μl(30 μmol/L),cDNA产物10μl,按照以下条件进行PCR反应。94℃预变性5min,94℃30s,57℃30s,72℃30s,30个循环后,72℃延伸7min。取5μlPCR扩增产物加样至含溴化乙锭(EB)20g/l的琼脂糖凝胶中,在5V/cm下电泳60min,紫外透视仪下观察结果,并用凝胶扫描成像系统照相,PCR定量分析软件进行分析。

    1.2.6致瘤性取18只BALB/C裸鼠,随机分为3组,背部皮下组、颈部皮下组、对照组各6只。收集培养7d的MSCs,用PBS重悬并调整细胞密度为1x107/ml,非麻醉状态下,于裸鼠背部及颈部皮下分别无菌注射细胞悬液0.5ml,每只各4点.注入生理盐水作为对照组。定期观察,于3d、2周和8周取材,制作冰冻切片,HE染色,镜下观察。之后继续观察裸鼠生长情况至12周。

    1.3统计学方法

    数据以x+s表示。采用SPSSl2.0软件对数据进行重复测量数据的分析,显著性水准取α=0.05。

    2.结果

    2.1脐血单个核细胞体外分离、培养后形态改变

    培养前,脐血单个核细胞胞体较小,呈大小均一的圆形,直径约17μm ......
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