丹栀逍遥散胶囊对慢性应激抑郁模型下丘脑单胺类神经递质的影响(1)
[摘要] 目的：探讨丹栀逍遥散胶囊抗抑郁作用机制。方法：采用孤养法加上慢性不可预见的温和性应激方法，造成抑郁状态动物模型。观察丹栀逍遥散胶囊对该型大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响。结果：丹栀逍遥散胶囊能通过调节5-HT及其代谢产物5-HIAA达到抗抑郁的作用，能通过调节DA含量而改善抑郁症状，而对DOPAC含量的改变不明显。结论：丹栀逍遥散胶囊能调节下丘脑单胺类神经递质的含量，可能是其发挥抗抑郁作用内在机制。
[关键词] 丹栀逍遥散胶囊；慢性应激；抑郁模型；神经递质
[中图分类号]R965 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2007)10(c)-061-02
我们在建立大鼠抑郁性神经症模型的基础上，应用高效液相色谱-EC法观察药物干预对下丘脑内单胺类神经递质的变化的影响，旨在进一步探讨药物治疗抑郁性神经症的内在机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物分组
雄性SD大鼠(200±20)g，由郑州大学实验动物中心提供，实验前在实验室适应1周，温度保持在(25±2)℃，相对湿度为75%，除特殊刺激和要求外，动物自由饮水摄食。实验前旷场分析实验对每只大鼠进行行为学评分，选择各项行为学指标得分相近的50只大鼠随机分为5组：①空白对照组；②模型组；③氟西汀组；④丹栀逍遥散胶囊高剂量组；⑤丹栀逍遥散胶囊低剂量组。每组10只。
1.2 实验药物及给药方法
丹栀逍遥散胶囊：牡丹皮、栀子各3 g，柴胡、当归、白芍、茯苓、白术各6 g，甘草3 g。以上药材均由郑州市药材公司提供，经鉴定均为纯正药材。上述药物按成年人70 kg体重剂量的2倍、4倍分别水煎浓缩至含生药0.26、0.52 g/ml，高压灭菌，4℃冰箱保存备用。氟西汀，20 mg/粒，美国lilly公司制造，生产批号208151。
空白对照组正常喂养。其他组分别按氟西汀组0.75 mg/kg、加味丹栀逍遥散胶囊低剂量组0.26 g/kg、加味丹栀逍遥散胶囊高剂量组0.52 g/kg的剂量，1.0 ml/100 g的给药量灌胃给药，空白对照组和模型组按1.0 ml/100 g的给药量灌胃生理盐水，1次/d，每天应激前灌胃，从造模第1天开始，至动物处死当天。
1.3 试验的试剂及仪器
试剂：多巴胺(DA)盐酸盐，5-羟色胺(5-HT)盐酸盐，3，4-羟基苯乙酸(DOPAC)，5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，半胱氨酸，以上均为Sigma公司产品。乙二胺-四乙酸二钠(EDTA，分析纯)，辛烷基磺酸钠(东京化成工业株式会社产品)，无水乙酸钠(分析纯)，柠檬酸(分析纯)，正丁胺(化学纯)，高氯酸(分析纯)，甲醇(一级品，高效液相色谱专用)。实验用水为重蒸馏水。
仪器:高效液相色谱仪，由岛津LC210A系列组成。
1.4 造模方法(除空白对照组)
大鼠抑郁动物模型为慢性轻度不可预见性的应激加单居模型，参照Willner和Towell等[1]的方法复制，并加以改进。以雄性SD大鼠造模，模型制作的应激处理参考文献改进如下:电击脚底(电压100 V，电击延迟1 s，每次电击持续1 min，共3次)；寒冷刺激(4℃，每次持续5 min，共2次)；热刺激(45℃，每次持续5 min，共2次)；摇晃(速率1次/s，15 min，共1次)；夹尾(每次持续1 min，共2次)；禁水(20 h，共1次)；禁食(20 h，共1次)；昼夜颠倒(共1次)。将这几种不同的应激因子在实验全程中应用，顺序随机，使大鼠不能预料刺激的发生，平均每种刺激使用2次，同时配合单笼饲养(单居)，共刺激21 d。
1.5 观察指标
3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)含量。
1.6 样品的制备及测定
试验结束时，立即断头处死，取大鼠大脑，置于冰皿上，按Glowinski法分离下丘脑[2]，称重后测定1 g下丘脑组织的DOPAC、DA、5-HIAA、5-HT的含量(ng)，计量单位以ng/g表示。
1.7 统计学方法
实验结果用均数士标准差(x±s)表示，运用SPSS 13.0统计软件，采用t检验方法进行统计分析。
2 结果
2.1 各组大鼠下丘脑内5-HT、5-HIAA含量变化比较(表1)
由表1可见，与模型组比较，丹栀逍遥散胶囊高剂量组大鼠下丘脑内5-HT、5-HIAA含量明显升高，差异有显著性(P, 百拇医药(李红娅 石延榜 蒋艳玲)
[关键词] 丹栀逍遥散胶囊；慢性应激；抑郁模型；神经递质
[中图分类号]R965 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2007)10(c)-061-02
我们在建立大鼠抑郁性神经症模型的基础上，应用高效液相色谱-EC法观察药物干预对下丘脑内单胺类神经递质的变化的影响，旨在进一步探讨药物治疗抑郁性神经症的内在机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物分组
雄性SD大鼠(200±20)g，由郑州大学实验动物中心提供，实验前在实验室适应1周，温度保持在(25±2)℃，相对湿度为75%，除特殊刺激和要求外，动物自由饮水摄食。实验前旷场分析实验对每只大鼠进行行为学评分，选择各项行为学指标得分相近的50只大鼠随机分为5组：①空白对照组；②模型组；③氟西汀组；④丹栀逍遥散胶囊高剂量组；⑤丹栀逍遥散胶囊低剂量组。每组10只。
1.2 实验药物及给药方法
丹栀逍遥散胶囊：牡丹皮、栀子各3 g，柴胡、当归、白芍、茯苓、白术各6 g，甘草3 g。以上药材均由郑州市药材公司提供，经鉴定均为纯正药材。上述药物按成年人70 kg体重剂量的2倍、4倍分别水煎浓缩至含生药0.26、0.52 g/ml，高压灭菌，4℃冰箱保存备用。氟西汀，20 mg/粒，美国lilly公司制造，生产批号208151。
空白对照组正常喂养。其他组分别按氟西汀组0.75 mg/kg、加味丹栀逍遥散胶囊低剂量组0.26 g/kg、加味丹栀逍遥散胶囊高剂量组0.52 g/kg的剂量，1.0 ml/100 g的给药量灌胃给药，空白对照组和模型组按1.0 ml/100 g的给药量灌胃生理盐水，1次/d，每天应激前灌胃，从造模第1天开始，至动物处死当天。
1.3 试验的试剂及仪器
试剂：多巴胺(DA)盐酸盐，5-羟色胺(5-HT)盐酸盐，3，4-羟基苯乙酸(DOPAC)，5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，半胱氨酸，以上均为Sigma公司产品。乙二胺-四乙酸二钠(EDTA，分析纯)，辛烷基磺酸钠(东京化成工业株式会社产品)，无水乙酸钠(分析纯)，柠檬酸(分析纯)，正丁胺(化学纯)，高氯酸(分析纯)，甲醇(一级品，高效液相色谱专用)。实验用水为重蒸馏水。
仪器:高效液相色谱仪，由岛津LC210A系列组成。
1.4 造模方法(除空白对照组)
大鼠抑郁动物模型为慢性轻度不可预见性的应激加单居模型，参照Willner和Towell等[1]的方法复制，并加以改进。以雄性SD大鼠造模，模型制作的应激处理参考文献改进如下:电击脚底(电压100 V，电击延迟1 s，每次电击持续1 min，共3次)；寒冷刺激(4℃，每次持续5 min，共2次)；热刺激(45℃，每次持续5 min，共2次)；摇晃(速率1次/s，15 min，共1次)；夹尾(每次持续1 min，共2次)；禁水(20 h，共1次)；禁食(20 h，共1次)；昼夜颠倒(共1次)。将这几种不同的应激因子在实验全程中应用，顺序随机，使大鼠不能预料刺激的发生，平均每种刺激使用2次，同时配合单笼饲养(单居)，共刺激21 d。
1.5 观察指标
3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)含量。
1.6 样品的制备及测定
试验结束时，立即断头处死，取大鼠大脑，置于冰皿上，按Glowinski法分离下丘脑[2]，称重后测定1 g下丘脑组织的DOPAC、DA、5-HIAA、5-HT的含量(ng)，计量单位以ng/g表示。
1.7 统计学方法
实验结果用均数士标准差(x±s)表示，运用SPSS 13.0统计软件，采用t检验方法进行统计分析。
2 结果
2.1 各组大鼠下丘脑内5-HT、5-HIAA含量变化比较(表1)
由表1可见，与模型组比较，丹栀逍遥散胶囊高剂量组大鼠下丘脑内5-HT、5-HIAA含量明显升高，差异有显著性(P, 百拇医药(李红娅 石延榜 蒋艳玲)
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