黄连解毒汤中三种成分在大鼠体内的药代动力学研究(2)
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1.3.4 色谱条件选用CenturySIL BDS C18柱(250 nm×4.6 nm,5 μm),不同流动相和检测波长对3种成分进行分离,具体条件见表1。
1.3.5 血浆样品预处理实验大鼠眼底取血至肝素化试管中,离心后得空白血浆。取空白血浆,加入内标液/甲醇液1 ml(盐酸小檗碱加补骨脂素内标液1 ml;黄芩苷加芦丁内标液1 ml;栀子苷加甲醇液1 ml),再加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液50 μl,于微型旋涡混合仪混合30 s,6 000 rpm离心,吸取上清液800 μl,45℃以下氮气吹干,以50 μl甲醇复溶,旋涡混匀,离心,取上清液20 μl进样。
2结果
2.1 标准曲线的制备
分别配制盐酸小檗碱浓度为0.497,0.994,4.970,9.940, 14.480,29.960 μg/ml的系列血浆,按“血浆样品预处理”方法处理样品,在相应色谱条件下进样,以盐酸小檗碱与补骨脂素峰面积比(Y)对盐酸小檗碱浓度(X)作线性回归;配制黄芩苷浓度为30.14,49.94,99.00,149.60、198.00、253.00 μg/ml的系列血浆,按“血浆样品预处理”方法处理样品,在相应色谱条件下进样,以黄芩苷与芦丁峰面积比(Y)对黄芩苷浓度(X)作线性回归;配制栀子苷浓度为1,5,15,20,25,40 μg/ml的系列血浆,按“血浆样品预处理”方法处理样品,在相应色谱条件下进样,以栀子苷峰面积(Y)对栀子苷浓度(X)作线性回归。回归方程及线性范围见表2。
2.2 精密度和准确度实验
分别配制盐酸小檗碱浓度为0.994,9.940,29.960 μg/ml的系列血浆;配制黄芩苷浓度为49.94,149.60,253.00 μg/ml的系列血浆;配制栀子苷浓度为5,20,40 μg/ml的系列血浆 ......
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