HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质(2)
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2.5 精密度试验
取“2.4”项下方法配制两种有关物质的3号溶液，分别取20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，测定各有关物质的峰面积，计算焦谷氨酸、环(甘氨酰-L-酪氨酸)的RSD值分别为0.70%，0.67%。
2.6 定量限和最低检出限
配制不同浓度的2种已知杂质的对照品溶液，分别取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。当主成分峰高为噪音峰高的10倍时，焦谷氨酸、环(甘氨酰-L-酪氨酸)的定量限为0.8，0.7 ng；当主成分峰高为噪音峰高的3倍时，焦谷氨酸、环(甘氨酰-L-酪氨酸)的最低检出限为0.3，0.2 ng。
2.7 回收率试验
精密称取样品25 mg，分别称取6份，分别置100 ml量瓶中，分别精密加入“2.4”项下方法配制两种有关物质的3号溶液各20 ml，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取20 μl注入高效液相色谱仪，计算焦谷氨酸、环(甘氨酰-L-酪氨酸)的加样回收率，结果分别为100.2%，99.8%；RSD(n=6)分别为1.0%，1.2%。
2.8 样品测定
精密称取本品适量，加水溶解并稀释制成每1毫升约含甘氨酰-L-谷氨酰胺2 mg的溶液，作为供试品溶液；分别精密称取焦谷氨酸、环(甘氨酰-L-酪氨酸)对照品约20 mg，置同一10 ml容量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀，作为杂质对照品溶液；精密量取上述两种溶液各1 ml，置同一100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，环(甘氨酸-L-酪氨酸)和焦谷氨酸按外标法以峰面积计算，结果自制样品的环(甘氨酸-L-酪氨酸)和焦谷氨酸的含量分别为0.006%，0.004%。
3 讨论
本试验中曾选用多种色谱柱，经比较柱压、保留时间、拖尾因子等因素，最终采用本实验所用色谱柱。
对于含有多种有关物质的甘氨酰-L-谷氨酰胺，控制产品的质量较困难。本文通过上述色谱条件，提供了一种准确、灵敏、快速的测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的方法。
[参考文献]
[1]《化学药物杂质研究的技术指导原则》课题组.化学药物杂质研究的技术指导原则[S].2005.
[2]中华人民共和国国家药典委员会.《中国药典》2005年版附录增修订内容汇编(2005年版二部附录)[S].北京：化学工业出版社，2005.
[3]北京市药品检验所.复方氨基酸(15)双肽(2)注射液质量标准[S].
(收稿日期：2007-12-13)
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