NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中的作用(2)

http://www.100md.com 2008年7月22日 金　娟

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     1.2.5 western blotting 检测NOX4蛋白的表达去除培养液，PBS洗涤细胞两次，加入预冷裂解液200 μl孵育20 min，以上操作在冰上完成。4℃ 12 000 g离心10 min，收集上清液，测定蛋白浓度。灌注12%SDS-PAGE胶，恒压80 V电泳，待溴酚蓝染料带进入分离胶后将电流调至120 V，当溴酚蓝带到达凝胶底部时，停止电泳。350 mA进行恒流电转移1 h，用含5%封闭液封闭膜1 h，一抗室温孵育2 h，TTBS洗膜5 min，3次，加入1:3 000稀释的辣根过氧化物酶标记的相应二抗孵育1 h，洗膜5 min，4次，ECL化学发光法压片显影。

    1.3统计学处理

    所有数据采用平均数±标准差表示，用SPSS10.0进行统计处理，统计学采用单因素方差分析检验，以P

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