健脾理气方药抑制HepG2人肝癌细胞增殖及诱导其凋亡的形态学研究(2)
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1.5标本制作
1.5.1 MTT法测定细胞增殖抑制率细胞培养24、48 h后，分别加入0.5%的MTT(5 mg/ml)，每孔20 μl，37℃作用4 h，弃培养液，加入DMSO 100 μl，37℃，10 min，轻轻摇动培养板，应用酶标仪检测540 nm波长处的OD值，计算细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率=(对照孔测定的平均OD值-用药组测定的平均OD值)/对照孔测定的平均OD值×100%。
1.5.2电镜标本制备用0.25%戊二醛原位固定贴壁生长在培养瓶内的细胞，然后用橡皮铲刮下细胞，将悬浮细胞转至离心管内，低温高速离心机离心2 000转/min，10 min，0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，1%锇酸二次固定30 min，梯度乙醇丙酮脱水，Epon812树脂包埋，超薄切片机(LKB-V)切片，醋酸铀和柠檬酸铅双重染色，透射电镜下观察、拍片。
2结果
2.1不同浓度药物血清对HepG2人肝癌细胞增殖的影响
药物血清作用24 h，中药小剂量药物血清组对HepG2人肝癌细胞未见明显抑制作用，其余各组均表现出不同程度的抑制作用；作用48 h，中药小剂量药物血清组对HepG2人肝癌细胞出现抑制作用，各药物血清组随着作用时间的延长，抑制更明显，抑制效应呈时间依赖性(见表1)。
2.2倒置相差显微镜观察培养中的细胞
倒置相差镜下，经药物血清处理后的HepG2细胞彼此失去连结，收缩变圆，轮廓清晰，贴壁能力减弱，易从培养瓶上脱落下来(图1)。相反，对照组细胞呈长梭形，大小均匀，铺展良好(图2)。
2.3透射电镜标本
电镜下，经药物血清处理的HepG2细胞，表面微绒毛减少甚至消失，核染色质浓集，胞质内有空泡形成，细胞膜起皱呈出芽状，可见凋亡小体形成 ......
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