结缔组织生长因子在肾血管性高血压大鼠心肌中的表达及意义(2)
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1.3 免疫组化染色法检测TGF-β、CTGF的表达
心肌组织标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚切片。按照S-P方法，步骤如下：切片脱蜡入水，蒸馏水洗5 min，PBS洗5 min×2次，滴加1滴3%H2O2溶液，38℃放置15 min，PBS洗5 min×3次，抗原修复液(9 ml 0.1mol/L枸橼酸溶液+41 ml 0.1mol/L枸橼酸钠溶液+450 ml水)水浴加热，煮沸10~15 min，冷却后PBS洗5 min×3次，滴加正常山羊血清封闭，室温30 min，甩净不洗，滴加兔抗大鼠CTGF多克隆抗体(1︰100工作浓度，武汉博士德)，4℃孵育过夜，PBS洗3 min×3次，滴加生物素化的羊抗兔IgG，37℃静置30 min，PBS洗3 min×3次，滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素，37℃静置30 min，PBS洗3 min×3次，DAB染色3~5 min，苏木素复染，盐酸酒精分化，PBS返蓝，常规脱水透明，中性树胶封片，镜检。使用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统进行分析。随机选取每张切片至少10个视野(×200倍)自动选取阳性区域并计算平均光密度值.
1.4 统计学处理
数据资料以x±s表示，组间比较采用t检验和单因素方差分析及相关分析，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 鼠尾动脉压
各组术前SBP无明显差异，术后SBP：SC组较术前无明显变化，RC1、RC2组术后1周尾动脉压开始升高，4周显著增高，与SC相比有显著性差异(P<0.01)，RC1与RC2相比无显著性差异(P>0.05)，提示RVH模型成功(表1)。
2.2左心室重(LVW)、左心室重与体重比值(LVW/BW)
RC1组与SC相比，LVW、LVW/BW分别增加了38%、49%；RC2组LVW、LVW/BW进一步升高(P<0.01)。
2.3 VG胶原染色
采用VG胶原染色法使大鼠心肌胶原染色，SC组可见心肌间质内少许散在的细丝状红色胶原，RC1组间质内可见较粗大的波状纤维束，RC2组间质内见粗大的波状纤维束聚集成板状 ......
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