中药芪红合剂对肾间质纤维化模型大鼠肾组织中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的影响董华玲 马 华(2)
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1材料和方法
1.1实验药物、试剂
1.1.1芪红合剂由黄芪、红花、大黄、水蛭等组成，按比例称取后由山西医科大学第二医院中药制剂室煎制，每毫升药液中含生药3.7 g。
1.1.2 依那普利佛山雅来制药有限公司提供，5 mg/粒
1.1.3 主要试剂基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1) 免疫组化试剂盒、原位杂交试剂盒纤维连接蛋白(FN) 免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。
1.2实验方法
1.2.1 动物分组和造模雄性Wistar大鼠40只(由山西医科大学动物实验中心提供，二级)，体重(150±3) g。常规饲养7 d后，随机分为4组：假手术组(A组)、手术模型组(B组)、芪红合剂组(C组)、依那普利组(D组)，每组10只。采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型(UUO)，模型制备方法参考文献[2]。术前3 d开始灌胃给药，假手术组、手术模型组正常进水进食，芪红合剂组每天给予芪红合剂2 ml/只，依那普利组按10 mg/kg给予依那普利每天1次。手术后第14天以10%水合氯醛0.03 ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，从腹主动脉采血，分离血清，用于测定血生化指标；摘取左肾分别用10%中性甲醛和4%的多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，用于免疫组化分析和原位杂交分析。
1.2.2观察指标
1.2.2.1血生化指标的检测血尿素氮(BUN)采用二乙酰一肟法、血肌酐(Scr)采用苦味酸不除蛋白法测定。
1.2.2.2肾组织病理观察石蜡包埋切片行HE和Masson染色。光镜下观察肾小管及间质的结构及变化。Masson染色在400倍光镜下观察肾间质胶原纤维染色，每组选取8张切片，每张切片选取不重复的8个视野。采用BI2000医学图像分析系统进行半定量分析，计算肾间质Masson染色阳性面积及阳性面积占整个视野百分比。
1.2.2.3肾组织TIMP-1、FN免疫组织化学观察肾组织中TIMP-1、FN免疫组化采用SABC法，采用BI2000医学图像分析系统，在400倍光镜下测量每个显示屏的阳性染色面积和染色强度(平均光密度)。每组选取8张切片，每张切片测量8个视野进行半定量分析。
1.2.2.4肾组织TIMP-1原位杂交观察石蜡切片经常规脱蜡至水 ......
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