荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义
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[摘要] 目的：分析386例以荧光定量PCR法检测的HBV-DNA结果，以探讨其临床价值。方法：血清标本同时以酶免法检测乙肝两对半，以荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：大三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为95.5%，拷贝数为(4.32±1.63)×106/ml；小三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为55.5%，拷贝数为(2.45±2.23)×105/ml；HBsAg、HBcAb阳性模式中HBV-DNA定量阳性率为35.7%，拷贝数为(6.74±1.18)×104/ml；HBsAg、HBeAg阴性模式中HBV-DNA定量阳性率为3.84%，拷贝数为(2.14±1.11)×104/ml。结论：荧光定量PCR法检测HBV-DNA可以直接反映体内乙肝病毒(HBV)感染状态及病毒载量情况，有利于判断疾病的严重程度和传染性，更有利于临床治疗的药物选择和疗效观察。
[关键词] 乙型肝炎；荧光定量PCR；HBV-DNA
[中图分类号]R446.1[文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2008)11(c)-078-01
乙型肝炎是一种由乙肝病毒(HBV)感染引起的传染病。我国属HBV感染高流行区，一般人群的HBsAg阳性率为9.09%[1]。荧光定量PCR技术把PCR、杂交及光谱技术相融合，达到了对原始模板量定量的目的。HBV-DNA是乙肝病毒的遗传物质，HBV-DNA(PCR)是从血清中检测HBV存在的灵敏而直接的方法[2]。本文以386份血清标本分别用酶免法检测乙肝两对半和荧光定量PCR法检测HBV-DNA，进行对比分析。
1 材料与方法
1.1 标本来源与采集
386份血清标本均取自2007年8月～2007年12月我院门诊及住院的患者。其中，男212例，女174例，年龄6～58岁，平均31.6岁。空腹采取静脉血，血清标本采集后置-20℃冻存待测。
1.2 试剂、仪器与方法
采用上海荣盛生物有限公司生产的乙肝两对半试剂盒，用ELISA法进行HBV标志物检测并依据检测结果进行分组。HBV-DNA定量检测：采用深圳匹基生物有限公司生产的HBV核酸扩增荧光定量试剂盒，严格按试剂和说明书操作。使用厦门安普利Genelight9800检测HBV-DNA含量<1.00×103 copy/ml为检测下限。
1.3 统计学方法
数据用x±s或百分率(%)表示。
2 结果
荧光定量PCR检测结果，见表1。
3 讨论
乙肝“两对半”是从免疫学水平来检测HBV感染机体后引起免疫应答，由于个体反应的差异，不同的人在感染HBV后会出现不同的免疫应答，从而得到不同的“两对半”结果模式。但不能直接反应患者或患者体内病毒的复制水平及传染程度，不能提示其与乙型肝炎的发生和发展过程之间的联系。荧光探针定量PCR技术则是从分子生物水平直接检测HBV病毒自身的遗传物质DNA，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。大三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为95.5%(128/134)，拷贝数为(4.32±1.63)×106/ml，两者具有显著的相关性，反映病毒复制活跃、传染性强，应引起医生和患者的高度重视。但仍有6例大三阳患者其血清PCR为阴性，这种情况应考虑是否HBV基因的S区发生有意义的点突变或插入、缺失突变[3]。小三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为55.5%(81/146)，拷贝数为(2.45±2.23)×105/ml，反映一部分患者病毒复制趋于停止，传染性弱，而HBV-DNA>1.00×103 copy/ml，有可能为前C区和BCP区的变异，前C区最常见的变异为G1896A点突变，形成终止密码子(TAG)，不表达HBeAg，BCP区最常见的变异是A1762T/G1764A联合点突变，选择性地抑制了前CmRNA的转录，降低了HBeAg合成[4]。HBsAg、HBcAb阳性模式中HBV-DNA定量阳性率为35.7%(10/28)，拷贝数为(6.74±1.18)×104/ml，反映了一部分HBsAg(+)、HBcAb(+)患者仍有传染性，可能处于HBeAg转换。HBsAg、HBeAg阴性模式中HBV-DNA定量阳性率为3.84%(3/78)，拷贝数为(2.14±1.11)×104/ml。3份HBV-DNA为阳性，原因可能是S基因变异可导致隐匿性HBV感染，表现为血清HbsAg阴性，但仍可有HBV低水平复制(血清HBV-DNA常<1.00×104 copy/ml)[5]或者患者处于乙肝病毒感染窗口期，ELISA法检测不出 ......
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