黄芪对体外培养心肌细胞保护作用的实验研究(2)
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参见附件(1583KB，3页)。
1.2.6 电镜标本制备取生长良好的培养瓶分为正常对照组、模型组、实验组、实验对照组。先将培养的心肌细胞用0.1 mol/L磷酸缓冲液洗3次，2.5%戊二醛、1%锇酸分别固定30 min，取生长盖玻片以递增浓度的丙酮脱水，EPON定向包埋，37℃、45℃、60℃分别聚合12、24、36 h，用LKB 2088型切片机切成60 nm的超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅染色，JEM-1200 EX型透射电镜观察并摄片。
1.3 统计学方法
数据以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 11.5统计软件，利用方差分析及t检验进行数据分析处理。P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示差异有高度统计学意义。
2 结果
2.1 心肌细胞形态学观察
在倒置相差显微镜下观察各组心肌细胞。正常心肌细胞生长良好，心肌细胞数量多，细胞饱满，细胞突起较长，相邻细胞相互交织成簇生长，可见规律搏动。缺糖缺氧心肌细胞数量明显减少，细胞皱缩，细胞足突消失，细胞间耦联被破坏，出现微弱不规律的搏动。实验组与药物对照组和模型组比较，心肌细胞数量明显增多，细胞突起较长，可见相互交织成簇生长的心肌细胞团，搏动有规律且有力。
2.2 SOD活性及MDA含量的影响
实验组及药物对照组心肌细胞的SOD活性明显高于缺糖缺氧组(P<0.01)，MDA含量明显低于缺糖缺氧组(P<0.01)。
2.3 LDH活性的影响
模型组的培养液中LDH活性比正常对照组显著增高(P<0.01)，而实验组与药物对照组的LDH活性均较模型组明显降低，差异有高度统计学意义(P<0.01)。
2.4 黄芪对缺糖缺氧培养心肌细胞糖原含量的影响
用PAS法显示心肌细胞糖原，正常对照组心肌细胞胞质内充满深紫红色糖原颗粒，染色深，为强阳性。模型组心肌细胞胞质内几乎无糖原颗粒，染色浅，为弱阳性。实验组与药物对照组心肌细胞PAS反应均较模型组明显增强，胞质内糖原颗粒明显增多，染色深，呈强阳性。
2.5 黄芪对缺糖缺氧培养心肌细胞SDH活性的影响
正常对照组心肌细胞SDH活性为强阳性，染色深，蓝紫色沉淀颗粒分布均匀；模型组心肌细胞SDH活性明显减弱，为弱阳性，染色浅，蓝紫色沉淀颗粒明显减少；实验组与药物对照组心肌细胞SDH活性与模型组相比,其活性明显增强，呈强阳性，染色深，胞质内蓝紫色沉淀颗粒明显增多。
2.6 黄芪对缺糖缺氧培养心肌细胞LDH活性的影响
正常对照组心肌细胞 LDH活性为阳性，染色浅，胞质内棕黄色颗粒分布均匀。模型组心肌细胞 LDH活性明显增强，染色深，为强阳性，胞质内有大量棕黄色沉淀颗粒堆积。药物对照组及实验组心肌细胞ACP活性明显减弱，染色较浅，为阳性，胞质内棕黄色颗粒比模型组明显减少。
2.7 透射电镜观察
正常对照组心肌细胞，线粒体呈圆形或杆状，双层膜及嵴清楚可见，高尔基复合体可见，模型组心肌细胞质内，线粒体肿胀，嵴断裂，双层膜结构不清，高尔基复合体囊腔塌陷、变细。但是，实验组与药物对照组心肌细胞内上述变化均明显恢复，线粒体双层膜与内膜嵴清楚可见，高尔基复合体呈扁平囊状。
3 讨论
黄芪及其衍生物具有广泛的药理活性，临床上常用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫瘢、急性出血性肾炎、慢性气管炎、血管发脆、血管渗透压不正常等病症，同时还可预防和治疗糖尿病及合并高脂血症，对心、肾、脑等器官的缺血再灌注损伤具有保护作用，其治疗慢性支气管炎总有效率为84.4%。在食品工业中可作为抗氧化剂和天然食用黄色素[4,5]。SOD为直接清除自由基的酶，可阻断自由基促使产生LPO的链式反应，从而保护细胞不受自由基的损害。黄芪能增强SOD的活性，降低MDA含量，提高清除自由基的能力，减缓培养心肌细胞受自由基的攻击。而本实验用生化检测的方法检测出的SOD活性及MDA含量说明，黄芪可提高心肌细胞SOD的活性，清除自由基，并抑制脂质过氧化作用，保护心肌细胞免受缺氧损害[6,7]。
由本实验结果可见，黄芪能促进糖原合成，抑制糖酵解，从而减少糖原分解。它能抑制心肌细胞的糖酵解，减少糖原分解，促进糖原合成，并且纠正糖酵解过剩导致的细胞内酸中毒，阻碍细胞膜和膜性结构的过氧化作用，使损伤的心肌细胞也能在一定程度上纠正缺氧心肌细胞糖酵解过盛造成的细胞内酸中毒。
黄芪中的黄酮类能使受损的心肌细胞从结构和功能得以恢复的机制，与其具有抗脂质过氧化损伤和清除自由基能力及有稳定细胞膜和膜性结构的作用有关。因而对黄芪的生物活性有待于进一步深入研究。
[参考文献]
[1]杨再,陈佳铭,黄顺捷,等.黄芪提取物的生物活性研究[J].饲料与畜牧,2007(8):27-29.
[2]王秀云.黄芪多糖的药理研究进展[J].现代保健:医学创新研究,2007(08Z):35-36.
[3]姜玉顺,金美善,吴耕书,等.乳鼠肝细胞的体外培养及组织化学观察[J].延边医学院学报,1988,11(4):253.
[4]李卫平,明亮,张艳 ......
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