卵巢癌细胞MTT法对化疗药物敏感性的研究
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[摘要]目的：研究卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性，从而指导临床用药。方法：选用临床上常用的20种化疗药物，应用3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法，严格无菌操作，对20例卵巢实体肿瘤细胞进行化疗药药敏测定。结果：表明同一肿瘤细胞对不同化疗药物的敏感性各不相同，与药物对体内肿瘤细胞的杀伤作用呈正相关。结论：药敏结果与临床用药吻合率高，可以很好地指导临床个体化化疗。
[关键词] MTT法；卵巢癌；肿瘤细胞；药物疗法
[中图分类号] R361+3[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)01(b)-011-02
Research of chemotherapy drug susceptibility to ovary tumor cells by MTT method
YU Cui-zhen, LI Shuang-biao, LI Sheng-shui, ZHANG Feng-mei, LIU Yan
(Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine of Cangzhou City， Hebei Province, Cangzhou061001, China)
[Abstract] Objective: To study the chemotherapy drug susceptibility to ovary tumor cells,then provide reference to clinical drug use. Methods: Selected twenty kinds of chemotherapy drugs commonly used in clinical medicine and twenty kinds of ovary tumor cells,then detected the susceptibility of chemotherapy drugs to ovary tumor cells by MTT methods in sterile circumstances. Results: Same ovary tumor cells showed different susceptibility to different chemotherapy drugs,the susceptibility had positive correlation with the killing effect of chemotherapy drugs to tumor cells in vivo. Conclusion: There is high accordance rate between the drug sensitive test and clinical drug use, then can effectively guide the clinical drug use.
[Key words] MTT methods;Ovary cancer; Tumor cells; Drug therapy
卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，我国卵巢癌的发病率位于宫颈癌和宫体癌之后，居第三位，又因为卵巢癌患者在出现症状而得以诊断时已经发展到Ⅲ期或Ⅳ期。目前，卵巢癌是妇科肿瘤中病死率最高的肿瘤。卵巢癌的首要治疗方法是手术，但除了早期肿瘤外，Ⅲ期或Ⅳ期肿瘤手术难以切净，在外科，对不同分期的肿瘤患者进行手术后，无论能否切净，均需要术后辅助化疗，并且已经达成共识的是，正确的化疗对预后的影响，比姑息的减灭术更为重要。由于肿瘤细胞的异质性，凭借医生经验所选用的化疗药物针对性差。为此，以指导肿瘤化疗个体化、减少化疗用药的盲目性为目的的化疗药物敏感试验，日益受到临床医生的重视，并作为肿瘤个性化化疗的理论基础和依据[1,2]，现对我院及兄弟医院的20例卵巢实体癌对临床上常用的20种化疗药物的药物敏感性试验结果进行分析，报道如下：
1 资料与方法
1.1 临床资料
20例卵巢实体癌细胞来自2004～2007年妇科患者术后瘤体，其中，沧州中西医结合医院12例，妇幼保健院4例，和平医院2例，沧县医院2例，均经术中冷冻病理证实为恶性卵巢上皮性肿瘤。
1.2 标本采集
于肿瘤离体后30 min内，无菌切取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的肿瘤组织，开始放于无菌平皿或纱布中，然后放于盛有无菌生理盐水的瓶中送检。在二级生物安全柜内，用PBS液反复洗涤后去除肿瘤边缘的纤维及脂肪组织，眼科剪反复剪切成糊状，用200目不锈钢筛网过滤，以GKN液洗涤2次后加入DMEM完全培养液，配制成2×105/ml的单细胞悬液。
1.3 主要试剂
含20种化疗药物的微孔检测板(A、B两块板各含10种化疗药物)；DMEM完全培养液；MTT试剂，二甲亚砜(DMSO)。“肿瘤化疗药物敏感性检测”MTT法试剂为泰伦生物科技(石家庄)有限公司产品，批号：041025[3]。
1.4 化疗药物
本研究选用沧州中西医结合医院临床常用的20种化疗药物[A板10种：卡氮芥(BCNU)，紫杉醇(PTX)，阿霉素(ADM)，长春瑞滨(NVB)，表阿霉素(EADM)，米托蒽醌(MIT)，阿糖胞苷(Ara-C)，顺铂(CDDP)，环磷酰胺(CTX)，5-氟尿嘧啶(5-FU)；B板10种：长春新碱(VCR)，足叶乙苷(VP-16)，甲氨蝶呤(MTX)，卡铂(CBDCA)，平阳霉素(PYM)，氮烯咪胺(DTIC)，羟基喜树碱(OPT)，异环磷酰胺(ICTX)，草酸铂(L-OHP)，双氟胞苷(GEM)]配制成各种化疗药物备用。
1.5 肿瘤细胞培养
将A、B预制检测板从冰箱中取出，平衡至室温。将肿瘤细胞悬液均匀加入检测板微孔中(每孔200 μl)，每种药物设2个复孔，另设空白对照与调零孔；将检测板置于37℃，5% CO2培养箱内培养48 h后，每孔加入MTT试剂20 μl，轻轻混匀，继续培养6～12 h，取出检测板以1 000转/min离心15 min，每孔加入DMSO 100 μl，充分震荡直至微孔内的紫色结晶全部溶解，用酶联检测仪在570 nm读取各孔光密度(OD)值。
1.6 计算抑制率(IR)
相对抑制率(IR)=1-(给药孔平均OD值/对照孔平均OD值)×100%
IR>50%为高度敏感；30%≤IR≤50%为敏感；IR<30%为不敏感。
1.7 统计学方法
结果采用均数±标准差(x±s)表示。
2 结果
见表1。
3 讨论
恶性肿瘤具有异质性，患同种类型肿瘤的不同患者，甚至同一患者的不同疾病阶段，化疗效果差别都很大，故个性化化疗在肿瘤界达成共识，根据体外化疗药敏试验结果指导个体化化疗具有较好的前景[4-8]。MTT法是Mosman最早报道的，可精确测定恶性肿瘤细胞的生长及存活 ......
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