不同诱导方法对赤子爱胜蚓中的金属硫蛋白的影响(1)
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[摘要] 目的：选择适宜的方法诱导赤子爱胜蚓体内产生金属硫蛋白。方法：采用各种诱导因素(包括Zn、饥饿、振荡和光照)诱导蚯蚓产生金属硫蛋白。蚯蚓经诱导后，整体匀浆，再经热沉淀、乙醇沉淀后，得到其粗提物，用分光光度法测定巯基蛋白的含量。结果：各种诱导因素(Zn、饥饿、振荡和光照)诱导蚯蚓产生金属硫蛋白中巯基蛋白的含量分别为0.041, 0.023, 0.038和0.015 U/mg。结论：采用Zn诱导赤子爱胜蚓体内产生金属硫蛋白较好。
[关键词] 蚯蚓；金属硫蛋白；诱导方法
[中图分类号] Q513[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)01(c)-020-02
Effect of metallothionein in earthworms with different methods of induction
CHEN Jing
(Bioengineering College, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou310053, China)
[Abstract] Objective: To choose the best induction method of metallothionein in earthworms. Methods: Metallothionein was induced by different methods of induction, such as Zn, hunger, vibration and illumination. The whole earthworm homogenate after induction was followed by heat precipitation and ethanol precipitation. The content of sulfhydryl protein in the crude extraction was determined by spectrophotometer. Results: The contents of sulfhydryl protein of metallothionein, which was induced by different factors(Zn, hunger, vibration and illumination), were 0.041, 0.023, 0.038 and 0.015 U/mg respectively. Conclusion: The inducement with Zn is a better method to induce metallothionein in earthworms.
[Key words] Earthworm; Metallothionein; Induction
金属硫蛋白(metallothioneins，MT)是一类广泛存在于生物界的低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白，具有参与机体微量元素储存、运输和代谢、拮抗电离辐射、清除羟基自由基、重金属解毒及参与激素和发育调节、增强机体应激反应等广泛的生物学功能[1]。MT能结合汞、镉、铅等有毒重金属离子，而且结合后就成为稳定的金属硫蛋白的一部分，从而使其失去对细胞的毒害作用，并通过体内运转功能将其转移出体外。目前，经诱导合成的MT主要有镉金属硫蛋白和锌金属硫蛋白。然而目前金属硫蛋白的研究多以哺乳动物为材料，低等动物研究报道较少，蚯蚓作为低等环节动物，具有抗重金属及富集重金属的特性[2]。有关蚯蚓金属硫蛋白的分离、纯化和特性的研究已有报道[3-5]，但未见赤子爱胜蚓中金属硫蛋白不同诱导方法的研究。本文就MT的诱导方法作一研究，以期有助于选择和建立适宜的诱导方法。
1 材料、仪器与试剂
1.1 仪器与试剂
离心机UNIVERSAL 32(Hettich Gmb＆Co. KG)，循环水式多用真空泵SHBⅢA(河南省太康科教器材厂)，TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，摇瓶柜HYG(江苏太仓市实验设备厂)。所用试剂均为分析纯。
1.2 材料
赤子爱胜蚓由杭州新绿生态技术有限公司提供，经姚振生教授鉴定为Eisenia foetida sarigny。
1.3 培养基
培养基Ⅰ：干泥和适宜蒸馏水。培养基Ⅱ：干泥、适宜蒸馏水和白菜叶。培养基Ⅲ：干泥、适宜蒸馏水、白菜叶和ZnCl2(每克干泥含500 μg Zn)。
1.4 试剂的配制
考马斯亮蓝染液：考马斯亮兰G-250染液100 mg溶于50 ml 95%乙醇中，加入100 ml 85%磷酸，无离子水定容至1 000 ml，过滤。PBS缓冲液(10×)：NaCl 8 g、KCl 0.2 g、Na2HPO4·12H2O 1.54 g用水定容至100 ml。巯基试剂：DTNB 0.029 7 g、盐酸胍0.008 6 g、EDAT 0 ......
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