谈厌氧菌检验的重要性及注意事项
[摘要] 目的：研究厌氧菌检验的重要性及注意事项。方法：结合临床经验，回顾性阐述厌氧菌检验的注意事项。结果：厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视。临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。结论：不同地区和不同医院厌氧菌的耐药谱不同，经验用药时要根据本地区和本实验室的药敏谱选药。因此，为提高疗效，减少抗生素的毒副作用，最好根据药敏试验选择药物治疗。
[关键词] 厌氧菌；无氧；培养；检验
[中图分类号]R446.5 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)01(c)-119-01
厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视，临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。
, 百拇医药
1 厌氧菌检验概况
过去我国厌氧菌培养在实验室检验中开展的并不理想，临床医生重视程度不够，大多数实验室没有将厌氧菌培养作为常规检验开展，加上厌氧菌培养方法学落后，且受培养基的配制和保存的限制，制约了厌氧菌培养在实验室中的正常开展，造成厌氧菌的漏检率很高。据报道[1]，我国从未开展过厌氧菌培养的实验室占77%之多，有90%的实验室没有鉴定厌氧菌的设备，几乎所有临床细菌室均不开展厌氧菌药敏试验。近年来，国内从临床感染病例中分离出厌氧菌的报道日益增多，临床医生已认识到厌氧菌在感染性疾病中的重要性，并能识别厌氧菌的重要特征，能认真、正确地采样、送检，且随着厌氧菌培养技术的不断进步，厌氧菌检验已成为临床细菌学检验的重要组成部分。为提高感染性疾病的病原学诊断水平，开展厌氧菌培养是非常必要的。据资料显示，如仅做需氧菌培养，在23份漏检标本中检出9株厌氧菌，这说明在做细菌需氧菌培养的同时应做厌氧菌培养[2]，否则将会造成大量病原菌漏检，它不仅关系到疾病诊断的正确性，且影响治疗效果或导致治疗不彻底。
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2 厌氧菌检验的注意事项
2.1 标本选择
根据厌氧菌感染的临床特征，选择感染局部有气体产生，排出物有恶臭、带血、呈黑色或黄绿色，与肿瘤有关的感染，病程呈亚急性或慢性，发生在肛周、口腔、鼻窦、咽颊等部位的感染，长期使用氨基糖苷类抗生素无效者和应用甲硝唑及替硝唑治疗有效者。
2.2 标本送检
大气中的氧对厌氧菌有毒性作用，任何标本建议采用床边接种的方法，床边接种既能缩短标本接触空气的时间，又能较好地把好标本的质量关。不在床边接种的标本必须立即放入输送培养基中并马上送检。
2.3 检验人员的责任心
检验人员对厌氧菌标本要加倍重视，积极配合临床，主动到床边采集标本。厌氧菌培养成败的关键在一个快字，标本采集后要马上接种并放置于厌氧环境，对厌氧菌培养标本要做到标本到手后马上处理。厌氧菌生长物特别恶臭，所以观察结果时检验人员要不怕臭，仔细观察，多挑选可疑菌落做耐氧试验，这样才能成功地分离出厌氧菌。
, 百拇医药
2.4 标本涂片检查
在对标本做厌氧菌培养的同时进行涂片镜检，可早期把有厌氧菌生长的信息提供给临床，如普通需氧培养无细菌生长，但直接涂片见到大量细菌者，即可考虑为厌氧菌感染；如普通培养只有一种细菌生长但直接涂片可见2种或2种以上细菌者，可考虑患者为混合感染，这样可早期指导临床诊断，避免盲目用药造成耐药菌株产生，又可解决厌氧菌培养和药敏周期长的弊端。
2.5 培养基的选择和培养环境
初代接种厌氧菌最好使用新鲜配制的培养基，还可适当选用一些选择培养基，培养基使用前须进行预还原。培养环境选用厌氧袋或厌氧罐，两种方法价廉且操作简易；厌氧箱设备昂贵，操作复杂，不利于临床实验室的使用。目前，厌氧菌培养用OxyplatesTM培养法较好[3]，它无需其他厌氧装置，它的划线和培养在一个标准的厌氧培养基中，且能被反复打开使用多次，无须预先还原，便于实验室的使用，这种培养方法省去了厌氧罐、厌氧袋、厌氧箱等复杂、昂贵的消耗品，又能较好地分离出厌氧菌。
, http://www.100md.com
厌氧菌的鉴定可选用API 20A、VITEK-ANI、MICRO-01D、气液色谱仪等设备鉴定。厌氧菌的药敏试验，大部分实验室采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法[4]，该方法实用性强，适用于大量菌株的测定，有的实验室使用浓度梯度法(Etest)或ATB-ANA试条的方法，操作简便、快速。
3 厌氧菌感染的治疗
厌氧菌感染的治疗除针对原发病外，抗厌氧菌的治疗最为重要。替硝唑和甲硝唑对大多数厌氧菌感染治疗有效，故成为目前临床上抗厌氧菌的首选药物。由于多数厌氧菌感染是混合感染，联合使用抗厌氧菌和需氧菌药物是非常必要的。由于不同地区和不同医院厌氧菌的耐药谱不同，经验用药时要根据本地区和本实验室的药敏谱选药。因此，为提高疗效，减少抗生素的毒副作用，最好根据药敏试验选择药物治疗。
[参考文献]
[1]张秀珍.要加强我国临床细菌室厌氧菌的培养技术[J].中华检验医学杂志,2002,25(3):133-134.
[2]储从家,孔繁林,罗次节,等.同时做需氧厌氧培养提高血(体)液细菌培养阳性率[J].中华检验医学杂志,2002,23(5):285.
[3]吴多荣.氧净(OxyplatesTM)厌氧菌培养法的实验室应用[J].中国热带医学,2004,4(4):617-619.
[4]Ptrick R.Manual of clinical microbiology[M].7th ed. Washington DC: ASM press,1999.1555-1560.
(收稿日期：2008-10-20), 百拇医药(徐静媛)
[关键词] 厌氧菌；无氧；培养；检验
[中图分类号]R446.5 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)01(c)-119-01
厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视，临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。
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1 厌氧菌检验概况
过去我国厌氧菌培养在实验室检验中开展的并不理想，临床医生重视程度不够，大多数实验室没有将厌氧菌培养作为常规检验开展，加上厌氧菌培养方法学落后，且受培养基的配制和保存的限制，制约了厌氧菌培养在实验室中的正常开展，造成厌氧菌的漏检率很高。据报道[1]，我国从未开展过厌氧菌培养的实验室占77%之多，有90%的实验室没有鉴定厌氧菌的设备，几乎所有临床细菌室均不开展厌氧菌药敏试验。近年来，国内从临床感染病例中分离出厌氧菌的报道日益增多，临床医生已认识到厌氧菌在感染性疾病中的重要性，并能识别厌氧菌的重要特征，能认真、正确地采样、送检，且随着厌氧菌培养技术的不断进步，厌氧菌检验已成为临床细菌学检验的重要组成部分。为提高感染性疾病的病原学诊断水平，开展厌氧菌培养是非常必要的。据资料显示，如仅做需氧菌培养，在23份漏检标本中检出9株厌氧菌，这说明在做细菌需氧菌培养的同时应做厌氧菌培养[2]，否则将会造成大量病原菌漏检，它不仅关系到疾病诊断的正确性，且影响治疗效果或导致治疗不彻底。
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2 厌氧菌检验的注意事项
2.1 标本选择
根据厌氧菌感染的临床特征，选择感染局部有气体产生，排出物有恶臭、带血、呈黑色或黄绿色，与肿瘤有关的感染，病程呈亚急性或慢性，发生在肛周、口腔、鼻窦、咽颊等部位的感染，长期使用氨基糖苷类抗生素无效者和应用甲硝唑及替硝唑治疗有效者。
2.2 标本送检
大气中的氧对厌氧菌有毒性作用，任何标本建议采用床边接种的方法，床边接种既能缩短标本接触空气的时间，又能较好地把好标本的质量关。不在床边接种的标本必须立即放入输送培养基中并马上送检。
2.3 检验人员的责任心
检验人员对厌氧菌标本要加倍重视，积极配合临床，主动到床边采集标本。厌氧菌培养成败的关键在一个快字，标本采集后要马上接种并放置于厌氧环境，对厌氧菌培养标本要做到标本到手后马上处理。厌氧菌生长物特别恶臭，所以观察结果时检验人员要不怕臭，仔细观察，多挑选可疑菌落做耐氧试验，这样才能成功地分离出厌氧菌。
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2.4 标本涂片检查
在对标本做厌氧菌培养的同时进行涂片镜检，可早期把有厌氧菌生长的信息提供给临床，如普通需氧培养无细菌生长，但直接涂片见到大量细菌者，即可考虑为厌氧菌感染；如普通培养只有一种细菌生长但直接涂片可见2种或2种以上细菌者，可考虑患者为混合感染，这样可早期指导临床诊断，避免盲目用药造成耐药菌株产生，又可解决厌氧菌培养和药敏周期长的弊端。
2.5 培养基的选择和培养环境
初代接种厌氧菌最好使用新鲜配制的培养基，还可适当选用一些选择培养基，培养基使用前须进行预还原。培养环境选用厌氧袋或厌氧罐，两种方法价廉且操作简易；厌氧箱设备昂贵，操作复杂，不利于临床实验室的使用。目前，厌氧菌培养用OxyplatesTM培养法较好[3]，它无需其他厌氧装置，它的划线和培养在一个标准的厌氧培养基中，且能被反复打开使用多次，无须预先还原，便于实验室的使用，这种培养方法省去了厌氧罐、厌氧袋、厌氧箱等复杂、昂贵的消耗品，又能较好地分离出厌氧菌。
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厌氧菌的鉴定可选用API 20A、VITEK-ANI、MICRO-01D、气液色谱仪等设备鉴定。厌氧菌的药敏试验，大部分实验室采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法[4]，该方法实用性强，适用于大量菌株的测定，有的实验室使用浓度梯度法(Etest)或ATB-ANA试条的方法，操作简便、快速。
3 厌氧菌感染的治疗
厌氧菌感染的治疗除针对原发病外，抗厌氧菌的治疗最为重要。替硝唑和甲硝唑对大多数厌氧菌感染治疗有效，故成为目前临床上抗厌氧菌的首选药物。由于多数厌氧菌感染是混合感染，联合使用抗厌氧菌和需氧菌药物是非常必要的。由于不同地区和不同医院厌氧菌的耐药谱不同，经验用药时要根据本地区和本实验室的药敏谱选药。因此，为提高疗效，减少抗生素的毒副作用，最好根据药敏试验选择药物治疗。
[参考文献]
[1]张秀珍.要加强我国临床细菌室厌氧菌的培养技术[J].中华检验医学杂志,2002,25(3):133-134.
[2]储从家,孔繁林,罗次节,等.同时做需氧厌氧培养提高血(体)液细菌培养阳性率[J].中华检验医学杂志,2002,23(5):285.
[3]吴多荣.氧净(OxyplatesTM)厌氧菌培养法的实验室应用[J].中国热带医学,2004,4(4):617-619.
[4]Ptrick R.Manual of clinical microbiology[M].7th ed. Washington DC: ASM press,1999.1555-1560.
(收稿日期：2008-10-20), 百拇医药(徐静媛)