针刺百会、大椎对老年性痴呆大鼠脑内AChE的影响
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[摘要] 目的：探讨针刺百会、大椎对老年性痴呆大鼠的乙酰胆碱酯酶(AChE)含量的影响。方法：选用纯系Wistar老年大鼠52只，随机分为假手术组、模型组、针刺组和西药组，采用β-淀粉样蛋白向海马CA1区定向注射制作老年性痴呆模型，进行百会、大椎针刺治疗。检测大鼠脑内AChE的含量。结果：针刺老年性痴呆大鼠的百会、大椎穴，可降低脑组织内AChE的含量，与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：针刺能提高老年性痴呆大鼠的学习记忆能力，改善自由基代谢，促进老年性痴呆大鼠的智能恢复。
[关键词] 针刺疗法；老年性痴呆；乙酰胆碱酯酶
[中图分类号] R749.1 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210(2009)06(b)-077-02
阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是老年人最常见的神经变性疾病，以记忆障碍和其他认知功能障碍为主要临床表现，多以患者的海马和新皮层胆碱乙酰转移酶及乙酰胆碱(ACh)显著减少为特点，其病因尚不清楚。AD的发病率随年龄增高而增高，65岁以上患病率约为6%。近10年来国内外关于AD的研究进展很快，本研究采用颅内注射法进行实验研究，并针刺百会、大椎穴，以期找到治疗AD的更好方法[2]。
1 材料与方法
1.1 动物
选用纯系健康Wistar雄性大鼠52只，18～20月龄，体重(500±20) g，由黑龙江中医大学实验动物中心提供。
1.2 仪器与试剂
脑立体定位仪(NARISHIGE SN-2型)，电动离心机(北京医用离心机厂 LD5-2型)，电热恒温水浴箱(江苏省金坛市医疗仪器厂 RF-540型)，电热恒温培养箱(中国厦门医疗电子仪器厂 HWB-2型)，电动玻璃匀浆机(宁波新芝科学仪器研究所DY89-1型)，分析振荡器(江苏泰县医疗器械厂FZQ-2型)，托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂 TN-100B型)，722光栅分光光度计(上海第二分析仪器厂)。乙酰胆碱酯酶(AChE)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 方法
1.3.1 老年性痴呆模型的建立采用颅内注射法。52只Wistar大鼠，随机分为假手术组、模型组、西药组和针刺组，每组13只。针刺组、西药组和模型组大鼠术前12 h禁食、禁水，以20%乌拉坦(0.55 ml/kg)腹膜注射麻醉后，待角膜反射和肌张力消失后，将大鼠固定在脑立体定位仪上,按脑立体定位图谱(AP=2.22 mm，ML=3.0 mm，DV=2.8 mm)，用手摇牙科钻钻开颅骨，用微量进样器，向海马内注射1 μl孵育好的β-淀粉样蛋白(β-AP)[3]。5 min内注射完毕，留针5 min后缓缓起针，牙科泥封好颅骨，撒消炎粉，缝合，放入笼中常规饲养。术后每只每天肌肉注射青霉素20×105 U，连续3 d ,以预防感染。假手术组麻醉后，注射等量的生理盐水，缝合后放入笼中，并肌肉注射青霉素以预防感染。
1.3.2 实验方法7 d伤口完全愈合后，饮食正常，无肢体残疾，即开始治疗。针刺组用30号40 mm毫针，于模型大鼠头部百会、大椎穴(参照林文注等编著的《实验针灸学》)捻入0.5寸，并持续捻针5 min，而后留针20 min。持续治疗1个月。西药组给予实验浓度为40 mg/ml 的吡拉西坦(脑复康)生理盐水溶液，每天1次灌胃，剂量每次6 ml/kg次，共30 d。模型组和假手术组均给予等量生理盐水灌胃。
1.3.3AChE的检测行为学测试后，断头取一侧脑组织，冰生理盐水冲洗后，称重匀浆，按照试剂盒说明，检测AChE的含量。
1.4统计学处理
计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验。
2结果
模型组与假手术组比较，AChE含量明显升高(P<0.001)，提示造模成功。针刺组、西药组与模型组比较，AChE含量明显降低(P<0.05)。见表1。
表1 各组大鼠术后脑组织AChE含量比较(x±s)
与模型组比较，1)P<0.05；与假手术组比较，2)P<0.001
3讨论
针刺百会、大椎能提高老年性痴呆大鼠的学习记忆能力，经临床验证，针灸疗法对AD的智能及社会活动功能康复有积极作用，其疗效肯定。针灸单穴及复方治疗本病在古代文献已有记载。《难经·二十八难》云：“督脉者……上致风府，入属于脑。”百会和大椎均属督脉穴位，百会为“三阳五会”，大椎为“诸阳之会”，为手足诸阳之会。督脉与脑密切相关，督脉通于脑。中医学认为脑为髓海，其气血上冲于盖(百会)，下在风府。针刺此二穴可以激发经气，疏通经络，使脑髓得气血之荣养而复聪。周莉[4]亦观察到针刺百会可提高人的及时记忆能力及小鼠的学习成绩和记忆再现能力。
针刺百会、大椎可改善老年性痴呆大鼠脑内的自由基代谢。AD患者大脑中主要的病理变化为Aβ在脑内的纤维状沉积，Aβ可通过诱导产生氧自由基使脑细胞膜系统的脂质和蛋白质被氧化修饰，使活性氧(ROS)增加，还可通过激活小胶质细胞加剧氧化应激。Aβ是氧化应激与AD脑神经细胞死亡之间的耦联分子。因此氧自由基在AD的病理变化过程中起着重要作用。除了氧化修饰亚细胞结构和生物大分子造成损伤以外，氧自由基及其代谢产物可作为神经突触传递的调节物质而起作用。在氧化应激状态下，氧自由基及其代谢产物可促进突触前膜释放腺苷。腺苷与腺苷酸环化酶(AC)突触后膜上的α1受体结合后，可抑制其活性使细胞内环磷酸腺苷(cAMP)减少，而cAMP可抑制氧自由基的生成，α1受体拮抗剂可抑制氧自由基引起的突触前膜释放腺苷。故可以保护脑神经细胞[5]。
目前已公认，学习记忆与中枢胆碱能神经系统关系极为密切。资料表明，慢性酒精中毒大鼠记忆功能的降低与ACh缺乏有关。另有一项研究证实，慢性应激大鼠空间学习记忆障碍的同时，ACh含量下降。在中枢胆碱能神经系统中，ACh起着非常重要的作用。中枢胆碱能通路是构成学习记忆的重要通路，而ACh是其中重要的神经递质。它是由胆碱乙酰化酶合成，胆碱酯酶分解，通过ACh受体发挥生物学效应，在记忆、思维和智力中起着不可替代的作用[6]。而AChE是胆碱能神经递质乙酰胆碱的水解酶。近年来研究表明。AD患者脑组织中胆碱乙酰化酶活性明显降低，胆碱酯酶活性显著升高，造成Ach含量不足，导致中枢神经系统功能障碍，出现学习记忆及认知功能下降甚至智力丧失。且已有实验证实，在老年性痴呆的发病过程中，大脑组织中的神经递质明显减少，尤其是大脑皮质的乙酰胆碱及单胺类递质与血管性痴呆的智力下降密切相关。因此通过检测治疗前后脑组织中AChE含量，即可推测出ACh的含量，从而判断老年性痴呆大鼠的智能及记忆损害程度。在本实验表明，针刺老年性痴呆大鼠的百会、大椎穴，可以清除自由基，促进细胞代谢，降低AChE含量，改善大脑的学习记忆功能[7]。
[参考文献]
[1]王维治.神经病学[M].北京:人民卫生出版社,2007:266-272 ......
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