雄激素受体表达影响胃癌患者术后微转移(2)
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1.3 实时荧光定量PCR检测CEA-mRNA
术前以及术后第一天清晨抽取患者外周静脉血,肝素抗凝,为防止表皮细胞掺入,取第2管血约5 ml,淋巴细胞分离液分离有核细胞,再以Trizol抽提制备总RNA。采用上海久盛医疗用品有限公司的荧光定量PCR检测CEA-mRNA试剂盒,参照说明书进行操作。CEA扩增的上游引物为5'-GCCTTGACAAAACGTTCCTGG-3',下游引物为5'-GAACGGCGTGGATTCAATAGTG-3'。每实验设4个标准品,拷贝数分别为4×108、4×107、4×106和4×105,并设立阴性、阳性对照。用PE-7700荧光仪进行检测,根据标准曲线,得到各检测标本的浓度。参照试剂盒提供的阳性界值,CEA-mRNA>1 000 copies/ml为阳性。
1.4统计学处理
计数资料数据用百分率表示,计量资料数据用x±s表示,采用SPSS 11.1软件包进行统计学检验。统计方法采用卡方检验或t检验,危险因素分析采用logistic回归分析。P<0.05表示有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者临床特征分析
阳性组:切除方式,全胃切除9例,远端胃切除14例,近端胃切除4例;侵犯深度,早期组6例,进展期21例;分化程度,高分化3例,中分化14例,低分化10例;Brrmann分型:Ⅰ型8例,Ⅱ型10例,Ⅲ型6例,Ⅳ型3例。阴性组切除方式:全胃切除10例,远端胃切除17例,近端胃切除6例;侵犯深度,早期组8例,进展期25例;分化程度,高分化12例,中分化15例,低分化6例;Brrmann分型:Ⅰ型7例,Ⅱ型4例,Ⅲ型13例,Ⅳ型9例。两组患者微转移率、分化程度分布差异显著(P<0.05),而病程、发病部位差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.2Logistic回归分析结果
以手术后CEA-mRNA结果作为应变量,年龄、手术时间、切除方式、侵犯深度、分化程度、大体分型以及雄激素表达情况作为自变量,进行逐步logistic回归分析。发现有意义的危险因素OR值分别为:手术时间(OR=2.148,95%CI 1.785～2.563);侵犯深度(OR=1.268,95%CI 1.040～1.533);分化程度(OR=0.804,95%CI 0.577～1.103);雄激素表达情况(OR=0.652,95%CI 0.471～0.883)。
3 讨论
胃癌组织存在雄激素受体,有合成性激素的能力,可能是一种激素相关疾病[1]。胃癌中雄激素受体表达情况与病理类型、肿瘤浸润深度、分化程度等有关[2]。但是胃癌患者雄激素受体表达情况是否影响术后外周血胃癌细胞微转移鲜有报道。
研究发现,雄激素阳性表达与雄激素阴性表达胃癌患者在年龄、侵犯深度、大体病理类型等临床特征,以及手术时间和手术方式差别均不显著,而术后外周血CEA-mRNA水平差异显著[1]。雄激素阳性表达胃癌患者比雄激素阴性表达者中低分化程度较多[2]。雄激素表达情况与手术时间、浸润深度和分化程度一样,都是胃癌患者外周血微转移的单独危险因素[3]。
CEA是特异性较高的肿瘤相关抗原,在正常人造血细胞及外周血中无CEA-mRNA的表达。CEA-mRNA在细胞外环境中非常不稳定,如胃癌患者外周血中检测出CEA-mRNA,说明外周血中有胃癌细胞存在[3-4],提示出现外周血微转移。
胃癌患者外周血CEA-mRNA阳性率与临床特征,如病变浸润深度、分化程度、病理类型、分期等有关,也与手术具体情况,如手术时间、手术方式等有关[5-6]。本组研究的雄激素阳性表达与阴性表达胃癌患者年龄、浸润深度、大体病理类型、手术时间和手术方式差别均不显著,病理类型都是腺癌,说明雄激素表达差异是导致两组患者外周血微转移率差异最可能的原因。在术后综合治疗中,让雄激素受体阳性患者接受更为积极的辅助治疗可能是必要的。
本研究中,雄激素阳性表达胃癌患者与阴性表达者分化程度存在差异,而分化程度也是影响外周血微转移的因素之一[7-8],故该实验结论需要进一步研究加以确证。
血清睾酮含量随年龄、性别而异,且有昼夜变化[10-12]。所以,实验中进行睾酮测定时,固定统一采血时间,并选择同性别患者进行研究。另外,为了提高研究效率,实验中选择AR受体表达率较高的男性胃癌患者进行研究。
[参考文献]
[1]郭元彪,李蓉晖,陈曼玲.胃癌相关激素受体的研究进展[J].国外医学:肿瘤学分册,2002,29(2):135-140.
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[3]Ohashi N, Nakanishi H, Kodera Y, et al. Intraoperative quantitative detection of CEA mRNA in the peritoneal lavage of gastric cancer patients with transcription reverse-transcription concerted (TRC) method. A comparative study with real-time quantitative RT-PCR[J].Anticancer Res, 2007,27(4C):2769-2777.
[4]Ghaffari SR, Sabokbar T, Tahmasebi S, et al.Combining mammaglobin and carcinoembryonic mRNA markers for early detection of micrometastases from breast cancers—a molecular study of 59 patients[J] ......
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