他莫昔芬通过容积激活性氯电流抑制肝癌细胞增殖(2)
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参见附件(2232KB，3页)。
图1 TAM对SMMC 7721细胞增殖的作用
Fig.1 Inhibition of SMMC 7721 cell proliferation by tamoxifen
2.2 TAM对SMM C7721细胞周期的影响
15 mol/L TAM作用SMMC7721细胞24、48、72 h时,与对照组相比较,随着时间的延长G0/G1 期细胞明显增加,S 期细胞明显减少,G0/G1 期细胞由对照的(50.21±2.1)%,72 h时增加到(78.21±2.6)%(P<0.01),而S期细胞则从(38.14± 3.1)% 减少到(18.52±2.6)%,G2/M期细胞没有出现明显的变化(图2)。由此说明TAM阻滞了SMMC 7721细胞周期从G1期到S期的转化。
图2 TAM对SMMC 7721细胞周期的作用
Fig.2 Arrest of SMMC 7721 cell cycle progression by tamoxifen
2.3 TAM对SMMC 7721细胞容积激活性氯电流的影响
在47%低渗刺激条件下, SMMC 7721细胞产生容积敏感性氯电流,表现为弱外向优势,没有明显时间依赖性失活(图3 A) 。钳制于+80 mV 时, 电流密度为(58.21±7.43) pA/pF。细胞外灌流不同浓度的TAM,可抑制细胞容积激活性氯电流,随浓度升高,抑制作用逐渐增加。30 mol/L TAM几乎完全抑制容积激活性氯电流。IC50为(16.1±1.5) mol/L(图3 B)。
图3 TAM对SMMC 7721细胞容积激活性氯电流的作用
Fig.3 Inhibition of volume-activated chloride currents of SMMC 7721 cells by tamoxifen
2.4 TAM抑制SMMC 7721细胞增殖与容积激活性氯电流的关系
上述结果提示TAM能同时抑制SMMC 7721细胞增殖和容积激活性氯电流,为了探讨容积激活性氯电流在TAM抑制SMMC 7721细胞增殖中的作用,对相同浓度作用下的细胞增殖和容积激活性氯电流抑制率的相关性进行了分析,结果显示:两者呈正向直线相关(r=0.97,图4)。
图4 TAM抑制细胞增殖和容积激活性氯电流的相关性
Fig.4 the correlation between cell proliferation and the
volume-activated chloride current
3 讨论
他莫昔芬是一种雌激素拮抗剂。由于其副作用小及患者耐受性好而广泛应用于治疗乳腺癌、子宫内膜癌及子宫内膜异位症。近年的研究也发现TAM对某些雌激素受体阴性的肿瘤有治疗作用,其机制尚未明确。本实验结果显示TAM能浓度-时间依赖性的抑制雌激素受体阴性的肝癌SMMC 7721细胞的增殖,同时TAM也能浓度依赖性的抑制容积激活性氯电流。TAM对两者抑制作用具有几乎相同的IC50(抑制细胞增殖:(17.3±2.1) mol/L;抑制容积激活性氯电流:(16.1±1.5) mol/L,且TAM对两者的抑制作用呈正向直线相关。说明TAM可能通过抑制容积激活性氯通道的开放从而抑制了肿瘤细胞增殖。
TAM能同时抑制癌SMMC 7721细胞的增殖和容积激活性氯电流,那么TAM对容积激活性氯电流的抑制作用如何影响细胞增殖?接近IC50浓度的TAM(15 mol/L)作用于SMMC 7721细胞后,24、48、72 h分别收集细胞检测细胞周期,结果提示随着时间的延长, G0/G1 期细胞明显增加,S 期细胞明显减少。提示TAM阻滞了SMMC 7721细胞周期从G1期到S期的进展,从而抑制了细胞的增殖。
容积激活性电流在调节性细胞容积减少(RVD)中扮演了关键性的作用[7-8],水和离子流动以及细胞容积的改变,不论是肿胀或是皱缩都将影响细胞内各种大分子有机物的浓度,其中包括参与DNA合成的各种酶[9]。而在细胞周期进程中,细胞容积是逐渐增大的,尤其是在G1/S期转换点,而细胞可通过细胞容积调节的主要机制之一RVD 来维持细胞容积平衡[10]。在细胞G1/S期转换点,细胞需要摄取氨基酸、蛋白质合成原料以及处理细胞周期调节信号[11]。容积激活性阴离子通道在周期进程中作为细胞增殖所需的代谢复合物 (如氨基酸)的潜在转运体而发挥作用[12]。TAM很可能通过抑制容积激活性氯通道的开放从而影响了G1期向S期转换所需调节蛋白合成必须的物质的摄取,进而影响了细胞周期的进展,最终抑制了细胞的增殖。
综上所述,本研究展示了TAM能抑制肝癌SMMC 7721细胞的增殖,且其作用受容积激活性氯电流的调控。结果有助于进一步阐述TAM抗肿瘤作用的机制,特别是对雌激素受体阴性的肿瘤的作用。
[参考文献]
[1]Nichols, M. The fight against tamoxifen resistance in breast cancer therapy: a new target in the battle?[J]. Mol Interv, 2007, 7: 13-16.
[2]白文坤,王文奇,时昌文,等.他莫昔芬对人肝癌细胞增殖及ER、Smad4表达的影响[J].山东大学学报(医学版),2007,45:573-576.
[3]朱晓莉, 张祖贻, 朱毅. 雌激素受体拮抗剂他莫昔芬和4-羟基他莫昔芬治疗非小细胞肺癌的实验研究[J].药学进展,2002,26:344-348.
[4]张宇曦, 孔垂泽, 李振华,等. 17β雌二醇、他莫昔芬和雷洛昔芬诱导前列腺癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究[J].中华实验外科杂志, 2006, 23: 1526-1528 ......
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