四种牙科陶瓷材料细胞毒性研究(1)
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[摘要] 目的:初步评价牙科陶瓷材料的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同材料和浸提时间的浸提液对L929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响,从而对全瓷材料的生物相容性进行初筛。结果:各组A490 nm值均与阴性对照无显著性差异(P>0.05),材料毒性级别除培养48 h后金属烤瓷粉浸提液组的细胞毒性为1级外,其他各浸提液组均为0级。结论:四种材料体外细胞毒性实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性。
[关键词] 全瓷材料;生物相容性;体外细胞毒性实验
[中图分类号] R318.6[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)08(a)-038-02
Cytotoxicity study of four kinds of dental ceramics
ZHANG Xiaowei, LUO Xiaojin*
(Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)
[Abstract] Objective: To preliminarily evaluate the biocompatibility of four dental ceramics materials. Methods: According to ISO standards, in vitro cytotoxicity-test(MTT method) on L929 cells were carried on. Results: The A-value of each test group were similar to the negative control and the cytotoxicity of low-temperature ceramic group after 48 hours culture was in grade 1 and those of the other groups were all in grade 0. Conclusion: It is preliminarily estimated that four dental ceramics are safe for dental clinical application.
[Key words] Dental ceramics materials; Biocompatibility; In vitro cytotoxicity-test (MTT method)
目前临床普遍应用的金瓷修复体存在色彩及生物相容性等方面的不足,随着修复技术及材料学的发展,非贵金属烤瓷冠的不足之处亦表现出来[1],全瓷冠具有与牙釉质相似的折光性、颜色与邻牙协调等优点,临床效果良好[2]。全瓷修复技术是未来的发展方向。利用高强度、高韧性的全瓷材料,设计全瓷嵌体支架桥修复体,不仅牙体组织磨削少,而且可以避免冠边缘不良引起的牙周、牙体疾病,以及金属离子释放对人体健康的影响,并且美观耐用。良好的生物相容性是生物材料得以应用的重要前提[3],因此,针对生物医学材料包括牙科材料的生物学评价是十分必要和重要的。本文选用体外细胞毒性试验检测几种陶瓷材料对细胞增殖的影响,从而进行初步的生物相容性评价[4-6]。
1 材料与方法
1.1 制备浸提液
选择四种陶瓷材料如表1,制作四种陶瓷材料的长方体试件各3枚(10 mm×5 mm×5 mm),将试件打磨圆钝后,无水乙醇超声清洗20 min,去离子水冲洗数遍,干燥后在121℃、33 MPa压力下灭菌。将四种陶瓷分别置于10 ml RPIM 1640培养液中(表面积与浸提液之比为0.75 cm2/ml),后在37℃ 5% CO2条件下连续浸提72 h,制成浸提液,放入4℃冰箱保存。
1.2 细胞株
小鼠成纤维细胞株L929(第四军医大学实验中心提供)。
1.3主要试剂
RPIM 1640培养液(Invitrogen公司),MTT(上海普飞生物技术有限公司)实验前新鲜配制,二甲基亚砜。
1.4细胞毒性试验
选择对数生长期的L929细胞,用胰酶消化成单细胞悬液,接种于96孔培养板,调整细胞浓度为4×104个/ml。观察细胞贴壁良好后,弃去原培养液,按照实验分组分别将当日要用的四种材料的材料浸提液按10%的浓度加入小牛血清,后加入各实验组(200 μl/孔),阴性对照为RPIM 1640培养液(含10%血清)。分别培养24,48,72 h,终止培养后加入0.5% MTT(20 μl/孔),继续培养4 h,加入DMSO 150 μl置于室温下15～20 min,振荡培养板10 min使染色均匀,采用酶联检测仪在490 nm波长测定各孔光吸收值(A值),计算出各组的均值。以阴性对照的A值作为100%细胞增殖率,则各浓度组的细胞增殖百分率可依式1计算求出,按表2将浸提液各浓度组的P(%)转化为0～4级细胞毒性[7]。
P(%)=各浓度组A均值÷阴性对照组A均值×100%(式1)
表2 细胞增殖百分率与细胞毒性级的对应关系
1.5 统计学处理
所有计量资料以均数±标准差(x±s)表示,使用SPSS 11.5软件对结果进行统计学分析。采用方差分析进行统计学分析,P<0.05表示有显著性差异。
2 结果
表3列出在细胞培养24、48和72 h后各实验组和阴性对照组的A均值、细胞增殖率P和细胞毒性级别。可见相同培养时间内各实验组的A值之间的差异不显著,各实验组与对照组的A值差异也不显著,无统计学意义(P>0.05);随培养时间的延长,各组的A值都逐渐增高,各实验组与阴性对照组的A均值之间无显著性差异(A>0 ......
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