蒲地蓝消炎片微生物限度检查方法的验证(2)
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表 3 培养基稀释法测定回收率试验均值(cfu/ml)
从表3结果可以看出,该样品采用培养基稀释法测定,金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率均在70%以上,可采用培养基稀释法测定。
2.4 控制菌(大肠埃希菌、大肠菌群)的检查法验证
供试品为含生药粉的口服药,按照《中国药典》2005版微生物限度检查法的规定,需验证大肠埃希菌和大肠菌群,选择金黄色葡萄球菌作为阴性对照菌。
2.4.1 大肠埃希菌验证试验分为两组,试验组:取1∶10供试液10 ml,加入大肠埃希菌备用液1 ml,接种至100 ml胆盐乳糖培养基中,于35～37℃培养18～24 h,按照《中国药典》2005版微生物限度检查法进行检查;阴性菌对照组:取金黄色葡萄球菌菌悬液1 ml和10 ml的1∶10稀释级供试液,接种至100 ml的胆盐乳糖培养基中,35～37℃培养18～24 h,依大肠埃希菌检查法进行检查。
2.4.2 大肠菌群验证试验分为两组,试验组:取含10 ml胆盐乳糖发酵培养基管1支,加入1∶10供试液1 ml和大肠埃希菌备用液1 ml,于35～37℃培养18～24 h,按照《中国药典》2005版微生物限度检查法进行检查;阴性菌对照组:取金黄色葡萄球菌菌悬液1 ml和1∶10供试液1 ml,接种至100 ml的胆盐乳糖发酵管中,35～37℃培养18～24 h,依大肠埃希菌检查法进行检查。
2.4.3 结果大肠埃希菌组中试验组在培养18 h内检出大肠埃希菌,阴性菌对照组48 h内未检出金黄色葡萄球菌;大肠菌群组中试验组检出大肠菌群,阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。故可照上述供试液制备法进行蒲地蓝消炎片的控制菌检查。
3 讨论
为考察供试液制备过程中微生物受影响的程度,采用相应的稀释液代替供试品[4],加入试验菌作为对照组,按供试品组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌落数,结果菌回收率达到90%以上。
由于本品为复合制剂,其中任何具有抑菌作用的成分均可影响微生物限度检查的准确性[5]。实验结果表明,蒲地蓝消炎片对枯草芽胞杆菌、大肠埃希菌及控制菌无抑制作用,对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌有抑制作用,采用培养基稀释法可以稀释本品中的抑菌成分,从而消除其对细菌和真菌生长的影响。故采用培养基稀释法进行细菌、真菌及酵母菌检查,采用常规法检查蒲地蓝消炎片控制菌。
[参考文献]
[1]马越,特玉香,杜平华,等.16种中成药微生物限度检查法方法验证[J].中国药品标准,2005,6(6):12-15.
[2]国家药典委员会.中国药典[S].一部 ......
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