氨苄西林钠细菌内毒素检查法实验研究
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[摘要] 目的:建立氨苄西林钠的细菌内毒素检查方法。方法:按《中国药典》2005年版二部附录细菌内毒素检查法进行。结果:氨苄西林钠浓度为1.25 mg/ml时,对鲎试剂无增强或抑制作用,其细菌内毒素限值可定为0.2 EU/mg。结论:可用细菌内毒素检查法(凝胶法)代替家兔热原检查法控制其热原。
[关键词] 氨苄西林钠;细菌内毒素检查法;干扰试验
[中图分类号] R927.1[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)08(c)-013-02
Experimental study on the determination of the bacterial endotoxins in Ampicillin Sodium
CHENG Hongjie
(Anyang Institute for Drug Control, He'nan Province, Anyang 455000, China)
[Abstract] Objective: To establish a test method of bacterial endotoxins for Ampicillin Sodium. Methods: The experiment was developed according to the bacterial endotoxins test approved by Chinese Pharmacopoeia of 2005 edition. Results: Ampicillin Sodium did not inhibit or enhance the tachypleus amebocyte lysate with the concentration of 1.25 mg/ml, the limit of endotoxin was supposed as 0.2 EU/mg. Conclusion: The results suggest that bacterial endotoxins test (gel-clot method) can be used as an alternative method for the rabbit pyrogen test for Ampicillin Sodium.
[Key words] Ampicillin Sodium; Bacterial endotoxins test; Interfere factors test
氨苄西林钠(Ampicillin Sodium)为β-内酰胺类抗生素,临床上主要用于治疗敏感细菌所致的呼吸道感染、胃肠道感染、尿路感染、软组织感染等[1]。氨苄西林钠在《中国药典》2005年版中规定的方法为热原检查法[2],鉴于细菌内毒素检查法较家兔热原法灵敏、快速、简便易行、重现性好等优点,本文按《中国药典》2005年版细菌内毒素检查法[2]规定的方法,考察了氨苄西林钠对细菌内毒素检查的干扰情况,为其建立细菌内毒素检查法提供实验依据。
1 材料与仪器
1.1 实验材料
细菌内毒素工作标准品:10 EU/支,批号070612(湛江博康海洋生物有限公司)。细菌内毒素检查用水(BET水):规格5 ml/支,批号070126(湛江博康海洋生物有限公司)。鲎试剂(TAL):批号20070909(湛江安度斯生物有限公司);批号0706020(湛江博康海洋生物有限公司),规格均为0.1 ml/支,灵敏度(λ)均为0.25 EU/ml。氨苄西林钠:原料药批号0709011、0710013、0712014(安阳市康星制药厂),试验前热原检查均符合规定。
1.2 仪器
漩涡混合器:ZH-2型,天津药典标准仪器厂。电热恒温水槽:SSW型,上海博迅实业有限公司医疗设备厂。
2 方法与结果
2.1细菌内毒素限值(L)的确定
根据公式L=K/M,本品为注射剂,K=5 EU/(kg·h);《中国药典》规定本品热原检查剂量为M=25 mg/(kg·h)。本品内毒素理论限值L=0.2 EU/mg。
2.2 确定最小有效稀释浓度
本品为原料药,故MVD取1,最小有效稀释浓度C=λ/L=1.25 mg/ml。
2.3 TAL灵敏度复核
用BET水将内毒素工作标准品稀释成0.500、0.250、0.125、0.060 EU/ml的系列浓度,对所用2个厂家的TAL灵敏度进行复核,结果显示灵敏度均符合规定要求。见表1。
表1 TAL灵敏度复核实验结果
2.4 干扰试验预试验
按照中国药品检验标准操作规程[3]要求进行试验,将供试品用BET水依次稀释成2.50、1.25、0.62、0.31 mg/ml的系列溶液,记为NPC,另制备一同样浓度系列的供试品溶液,但在制备过程中加入含2λ浓度的内毒素工作标准品,记此系列为PPC,取不同厂家TAL,分别与上述NPC和PPC进行反应,其中NPC出现阳性或PPC出现阴性则表示有干扰影响。结果表明,氨苄西林钠对TAL试剂与内毒素反应,在1.25 mg/ml时无干扰作用。用2个厂家的TAL试剂对3批样品检测结果一致。结果见表2。
表2 预干扰试验测定结果
2.5 供试品干扰试验
将3批供试品用BET水分别稀释成最终浓度为1.25 mg/ml的溶液。用BET水和供试品稀释液分别将内毒素工作标准品配制成浓度为0.500、0.250、0.125、0.060 EU/ml的溶液,按照《中国药典》2005年版二部附录细菌内毒素检查法供试品干扰试验操作,用2个不同厂家的TAL进行试验,并同时作阴性对照和供试品对照 ......
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