结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究(3)
| 第1页 |
参见附件。
国外许多研究人员利用基因工程手段来克隆、表达ESAT6蛋白。2005年,Kulshrestha等[3]利用带有T7启动子的表达载体成功表达纯化了ESAT6蛋白。ESAT6具有多个与T、B细胞反应的表位,其主要的免疫优势细胞表位位于蛋白分子前70位氨基酸(aa)内,是结核分枝杆菌特异性非常高的蛋白[8],有较高的诊断价值。
本实验构建了CFP10和ESAT6免疫优势肽段的亚分子融合蛋白原核表达系统,表达CFP10和多表位肽ESAT6P。5个柔性氨基酸的多肽接头能减少甘氨酸的抗原性。本实验的主要目的之一是作为结核抗体检测的重要抗原,用于结核病的早期诊断,检测结果显示,以CFP10-ESAT6和对照PPD为抗原,应用ELISA法对结核病患者血清进行检测,敏感性分别为89.4%[(66+35)/(78+35)]和79.6%[(56+34)/(78+35)];特异性分别为96.3%和93.9%,表明以CFP10和ESAT6免疫优势肽段的亚分子融合蛋白作为抗原,避免了非特异性表位的影响,充分发挥了特异性细胞表位引发的专一性免疫反应,比传统的检测方法具有更高的敏感性和特异性。
本实验的另一个目的是获得该融合蛋白的特异性抗体,并将其作为诊断试剂在临床上运用。在免疫实验中,有4只兔子的抗CFP10-ESAT6P蛋白抗体在1∶8 000稀释条件下,仍然能获得较高的吸光度值,证明成功地获得了高效价的特异性免疫血清,为结核分枝杆菌的血清学诊断奠定了基础 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。