BAG-1\CDK4蛋白在结直肠癌中的表达及意义(2)
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1.2试剂
BAG-1、CDK4检测均采用SP法。兔抗人CDK-4单克隆抗体(原液)购自武汉博士德生物工程有限公司,兔抗人BAG-1单克隆抗体(原液)购自杭州华安生物技术有限公司,免疫组化染色SP试剂盒为Maxin公司产品,购自福州迈新生物公司。
1.3方法
所有标本常规脱水后,用10%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,连续切片,片厚4 μm,采用免疫组化SP法。BAG-1(1∶200)用热修复抗原(枸橼酸pH 6.0),CDK4(1∶50)采用微波处理修复抗原。石蜡常规脱蜡并水化,PBS缓冲液冲洗,过氧化酶阻断内源性过氧化酶的活性。每张切片加50 μl一抗,室温下孵育60 min,加50 μl生物素标记的二抗(SPKitC液),孵育10 min。加50 μl链亲和素-过氧化物酶溶液室温下孵育10 min,再加入新鲜配制的DAB溶液。流水冲洗,苏木素复染,中性树胶封固。对标本石蜡切片行SP免疫组化染色。以PBS代替一抗作为阴性对照,已知阳性切片作为阳性对照。
1.4 结果判定
BAG-1蛋白表达位于胞质及胞核,CDK4蛋白表达位于胞核,随机取用目镜网格测微尺任选10个视野(×400),每个视野下数100个肿瘤细胞,计算阳性细胞百分率。阳性细胞5%以下为阴性(-);5%～25%为弱阳性(+);26%～50%为中度阳性(++);50%以上为强阳性(+++)。
1.5 统计学处理
采用SPSS 16.0软件分析,统计阳性标本例数,计算阳性率,各组阳性率比较用χ2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1 正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌组织中BAG-1、CDK4蛋白的表达情况(图1、2,表1)
BAG-1蛋白在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织中的阳性表达见表1,阳性表达率分别为12.0%(3/25)、62 ......
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