HSP70在自然流产患者绒毛组织中的表达及其意义
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[摘要] 目的:通过检测HSP70在自然流产和人工流产患者绒毛组织中的表达,探讨其在早期自然流产中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测早期流产患者绒毛组织中HSP70的表达情况。结果:早期流产患者绒毛组织中HSP70呈高表达。结论:HSP70的激活参与了早期流产的发病。
[关键词] 早期流产;HSP70;绒毛组织
[中图分类号] R714.21 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2010)03(c)-157-02
在对子宫内膜容受性的研究中发现,免疫功能异常会导致自然流产。作为在正常子宫内膜的生长和功能维持中起重要作用的热休克蛋白(heat shock protein, HSP)家族,无论何种原因引起其表达异常,都将影响子宫内膜,从而可能导致妊娠失败。本研究通过免疫组化SP法检测早期自然流产患者绒毛组织中HSP70表达,并与人工流产术取出的正常绒毛进行比较,来探讨HSP70在早期自然流产中的作用,从而为本病发生机制提供理论依据。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选取2008年1月～2009年1月辽宁省兴城市妇女儿童医院妇科门诊就诊的孕12周以内难免流产患者51例作为实验组,选取同期孕12周以内无先兆流产而要求终止妊娠者30例作为对照组,排除带节育器妊娠,无肝肾疾病,近期无感染性病变、未行保胎及雌孕激素替代治疗。
1.2主要试剂
兔抗人HSP70多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂为进口分装,均购于Maxim公司。
1.3方法
将以负压吸引取出的绒毛清水冲洗干净后立即用10%甲醛液固定24 h以上,常规石蜡包埋,4 pm连续切片、编号保存。免疫组化SP染色法,DAB显色,按ABC免疫组化染色步骤为。①切片常规脱蜡至水,蒸馏水洗5 min×2;②10 ml/L H2O2封闭内源性过氧化物酶30 min,蒸馏水洗5 min×2;③微波修复抗原(pH 6.0柠檬酸缓冲液)10 min,蒸馏水洗5 min×2;④3 mol尿素消化30 min, PBS(10 mmol/L,pH 7.4)振洗5 min×2;⑤100 ml/L牛血清白蛋白(BSA)封闭15 min,室温吸干;⑥滴加一抗Bad,Bag1(稀释度为1∶50,1∶100,1∶200,1∶300,1∶400和1∶500),4℃过夜,37℃复温30 min,PBS振洗5 min×2;⑦滴加生物素化桥抗(1∶100),37℃,40 min,PBS振洗5 min×2,EnVision法滴加EnVision液37℃ 40 min,PBS振洗5 min×2;⑧滴加ABC复合物(1∶100),37℃,40 min,PBS振洗5 min×2;⑨DAB显色,衬染,脱水透明,封固,观察。所示见图1。
1.4 结果判定标准
采取半定量评分方法进行细胞染色计分,计数100个细胞,根据阳性细胞数目所占百分比计分,阳性细胞数<24%,记0分;阳性细胞数占25%～75%,记1分;阳性细胞数占76%以上,记2分。按染色深浅计分:浅黄色染色强度为弱,记0分;棕黄色为中等强度染色,记1分;棕褐色为强染色,记2分。以上两分值相加。每标本取3张切片,每切片取5个视野,计算平均值记为该标本得分:<2分记为阴性,≥2分记为阳性。
1.5统计学方法
应用SPSS 13.0统计软件进行数据处理,采用χ2检验进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
自然流产患者绒毛中HSP70表达显著增高,阳性率达70.6%,与对照组比较, 差异有统计学意义(χ2=23.63,P<0.01),见表1。
表1 HSP70在各组绒毛中的表达情况(例)
3 讨论
HSP是一组在进化上高度保守的蛋白质,其中又以HSP70分布最广泛,是重要“分子伴侣”,具有协同免疫、抗凋亡、保护机体免受炎症因子损害,在应激过程中起重要作用。作为一种应激蛋白,HSP在生理、病理和环境因素改变等情况下均可被诱导产生。研究发现,HSP70在子宫内膜、输卵管及蜕膜组织中均有表达,且随月经周期改变而波动,对维持子宫内膜正常生理作用有着重要意义,而在子宫内膜炎、子宫内膜息肉及内膜异位症等病理情况下呈高表达。最近在应激学的研究中发现,雌孕激素能够对应激反应产生抑制,妊娠期孕激素水平升高,使得子宫内膜产生容受,妊娠得以维持,这可以解释部分早期流产是由于孕酮缺乏所致。
本研究发现, 早期自然流产患者绒毛组织中HSP70普遍升高, 其分子学机制可能为HSP70的异常表达影响了激素和受体的结合,从而导致体内甾体激素信号传递中断,最终导致蜕膜不利于胚胎生长发育。此外,一些学者认为HSP70广泛存在于所有生物中,人与细菌有部分同源性,人体免疫系统长期暴露于微生物等环境中,反复感染后可能导致自身抗体的产生。子宫作为腹膜外器官,由于性交等因素长期暴露于机会感染的环境中,更增加了接触过敏原的机会,使得孕前就有可能产生了针对HSP70的自身抗体,导致自然流产。综上所述,笔者推测HSP可能通过以下几种机制对生殖功能产生负面影响:HSP在蜕膜组织异常表达引起体内激素紊乱、子宫敏感性增强;HSP蛋白分子具有抗原性,诱导免疫反应而成为免疫系统的攻击目标;HSP在人与微生物间有相同的抗原序列,结果导致自身免疫等原因而引发流产。
[参考文献]
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(收稿日期:2009-09-24)
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