应用PCR-反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种(2)
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参见附件。
1.2.5 PCR-DNA测序对PCR-RDBHA鉴定为NTM的BACTEC-960培养物再次进行PCR扩增,将扩增产物纯化后送上海生工生物工程有限公司进行DNA测序。
2 结果
2.1 PCR扩增
引物Ⅰ和引物Ⅱ扩增从126株经抗酸染色阳性的分枝杆菌临床分离株培养物制备的DNA模板,2%琼脂糖凝胶电泳检测均可见360 bp DNA扩增条带。
2.2 RDBHA检测
PCR阳性扩增产物RDBHA检测结果表明:126株中,115株鉴定为MTC,11株为NTM。NTM中,1株堪萨斯分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌,2株瘰疬分枝杆菌,4株胞内分枝杆菌,3株脓肿分枝杆菌,杂交结果见图1。
图1分枝杆菌菌种鉴定反向斑点杂交结果
(分枝杆菌菌种探针排列从左至右、上至下顺序依此为pMyc、pTub、pKan、pInt、pAvi、pGas、pMar、pGor、pScr、pSim、pSzu、pXen、pMar、pTer、pNon、pChe、pAbs、pFor、pSme、pPhl、pFla。A:MTC杂交结果;B:堪萨斯分枝杆菌杂交结果;C:胞内分枝杆菌杂交结果;D:戈登分枝杆菌杂交结果;E:瘰疬分枝杆菌杂交结果;F:脓肿分枝杆菌杂交结果)
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