干扰素生物活性两种测定方法的比较研究(2)
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1.2.13 干扰素α活性测定国家标准品批号97/04,-20℃贮存,7 500 IU/支。
1.2.14 器材96孔细胞培养板若干个,百级工作台,二氧化碳培养箱(三洋公司),酶标仪(Molecular Devices公司),生物倒置显微镜(COIC,重庆光学仪器厂),单道微量移液器,8道微量移液器,无菌1.5 ml塑料离心管和200 μl、1 ml tip头若干。
1.3 测定法(以下操作均为无菌操作)
1.3.1 方法一[1]①使WISH细胞在培养基中贴壁生长,按1∶2～1∶4传代,每周2～3次,于完全培养液中培养。轻摇WISH细胞,弃去培养瓶中的培养液,用PBS溶液洗2次后加消化液(0.5%胰蛋白酶消化液∶0.02% EDTA=1∶1,即1.5 ml∶1.5 ml)消化,镜下观察消化程度,见镜下大部分细胞离散后,吸弃消化液,立即加5 ml 10% DMEM培养液,终止消化反应,用10 ml移液管用力吹打将细胞吹散,镜下观察大部分细胞呈单个细胞,用10% DMEM培养液配成3.0×105个/ml的细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔100 μl,37℃,5%CO2条件下培养4～6 h。②标准品溶液的配制:取1支干扰素活性测定国家标准品,按使用说明书复溶后,用7% DMEM培养液稀释至1 000 IU/ml(IFN国家标准品直接加7% DMEM培养液220 μl稀释) ......
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