甲真菌病的3种实验诊断方法研究(1)
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[摘要] 目的:探索一种操作简便、结果可靠的甲真菌病检验方法。方法:对121例拟诊甲真菌病的患者分别采用KOH直接镜检法和浸软法进行病损指、趾甲的真菌镜检,并与真菌培养法进行比较。结果:直接镜检法检出58例(47.90%),20% KOH溶甲法检出118例(97.52%),真菌培养法检出72例(59.50%)。结论:20% KOH浸软法真菌镜检是一种适合临床的、检出率高、可行性强的甲真菌病诊断方法。
[关键词] 甲真菌病;镜检;培养
[中图分类号] R756.6[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)05(a)-029-02
Study of three laboratory tests for the diagnosis of onychomycosis
HU Jimei, ZENG Junrong, LIANG Haiyan, KUANG Jiaxi
(Clinical Laboratory, Conghua Central Hospital of Guangdong Province, Conghua 510900, China)
[Abstract] Objective: To find a simple, reliable and useful laboratory test for the diagnosis of onychomycosis. Methods: Nail samples from 121 clinically suspected cases of onychomycosis were screened by direct microscopic examination using potassium hydroxide (KOH) and KOH macerate pretreatment respectively, and compared withfungal culture. Results: Fungal elements were detected in 58 cases (47.90%) direct microscopic examination using KOH, 118 cases (97.52%) by KOH macerate pretreatment and 72 cases (59.50%) by fungal culture. Conclusion: Fungi microscopic examination using KOH macerate pretreatment is a reliable method that has high positive rate in the diagnosis of onychomycosis.
[Key words] Onychomycosis; Direct microscopy; Culture
甲真菌病(onychomycosis)是南方地区最常见的甲病,通常认为甲真菌病在人群中的发病率为3%～5%[1],占真菌病的20%～30%[2]。甲屑直接镜检和真菌培养是公认的诊断甲真菌病的“金标准”,但受取材的质和量等因素的影响,两者结合诊断的阳性率<70%[3]。近年来开展了剪取病甲做组织病理学检查[4]及PCR检测[5],使查菌的阳性率得以提高,但却存在制作复杂、耗时长等缺点,限制了它们的推广。临床上迫切需要一种准确、简便、快速、价廉、易行的方法用于甲真菌病的诊断。为探索一种操作简易、实验结果可靠的检验方法诊断甲真病,笔者采用20% KOH浸软病甲真菌镜检(简称浸软法)从甲标本中检测真菌,并与直接镜检法、真菌培养法(简称培养法)进行比较。
1 资料与方法
1.1 一般资料
121例均为2006年9月～2009年10月来我院皮肤科门诊就诊的患者,入选患者均符合甲真菌病的诊断标准[6]。其中,男59例,女62例;年龄17～65岁,病程30 d～24年,平均4.2年。观察病甲数目432份,靶甲数目121份,伴手足癣38例,有甲板外伤史12例。受检前1个月内均未接受过局部和系统抗真菌药物治疗。
1.2 标本采集
以75%酒精消毒病甲表面后,用消毒手术刀刮弃表层甲屑,刮取和剪取拟诊为甲真菌病的靶甲及甲下碎屑,分为3份,其中,81份病甲标本取自远端侧缘甲下型,40份取自全甲毁损型。
1.3 方法及判断标准
刮取其病甲远端边缘和甲床皮屑进行传统的KOH直接镜检[6],同时剪取病损指、趾甲末端少许标本做浸软法真菌镜检和真菌培养。3份标本分别按下述3种方法处理:
1.3.1 直接镜检法取刮下甲屑于载玻片上,加10% KOH 1滴溶解,10 min后观察,Olympus光学显微镜下见菌丝和(或)孢子者为阳性。皮肤癣菌:菌丝较细、规则、分隔、分枝,可见关节孢子。酵母菌:可见酵母细胞团、芽生孢子及假菌系。真菌:菌丝粗大,不规则,可见特殊结构。
1.3.2 培养法采用两管法,即甲屑同时接种于含氯霉素和放线菌酮的沙氏培养基与含氯霉素、不含放线酮的沙氏培养基(以上培养基均为自制),每管最少接种3点,置25～27℃培养,随时观察培养情况 ......
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