HPLC-ELSD法测定胎乐颗粒中黄芪甲苷的含量
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[摘要] 目的:建立高效液相法测定胎乐颗粒中黄芪甲苷含量的方法。方法:采用Phenomenon-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-水(33∶67);流速:1.0 ml/min,漂移管温度:50℃,气流量:1.5 L/min。结果:黄芪甲苷在1.008～10.080 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均回收率为97.29%,RSD=1.48%。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于胎乐颗粒中黄芪甲苷的质量控制。
[关键词] HPLC-ELSD;黄芪甲苷;胎乐颗粒;含量测定
[中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)05(a)-054-02
Content determination of Astragaloside in Taile Granules by HPLC-ELSD
PAN Tao1, XIA Xinhua2
(1.Maternal and Child Care Service Centre of Hu'nan Province, Changsha 410008; 2.School of Pharmacy, Hu'nan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208)
[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of astragaloside in Taile Granules by HPLC. Methods: The Phenomenon-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of acetonitrile and water (33∶67), the flow rate was 1.0 ml/min and the drift tube temperature was 50℃. Results: The linear ranges of astragaloside was at 1.008-10.080 μg (r=0.999 3), the average recovery was 97.29% with a RSD of 1.48%. Conclusion: The method is fast, reliable, accurate and can be used in the quality control of astragaloside in Taile Granules.
[Key words] HPLC-ELSD; Astragaloside; Taile Granules; Content determination
胎乐颗粒系临床经验方,由黄芪、山茱萸、黄精等十味中药精制而成,具有补气固肾,健脾养血,滋阴安胎的功效,临床用于治疗胎漏,胎动不安,阴道流血等引起的先兆流产。方中黄芪为君药,黄芪甲苷为其主要指标成分,故选择作为胎乐颗粒含量测定的对象。关于黄芪甲苷的含量测定方法文献报道较多,《中国药典》2005年版一部采用高效液相色谱蒸发光检测,蒸发光检测器(ELSD)目前已广泛应用于紫外最大吸收波长属于末端吸收范围的皂苷类成分的检测。采用该方法对胎乐颗粒进行含量测定, 操作简便、快速,精密度、平行性及重现性好,结果准确可信,可用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪;Alltech 3300蒸发光散射检测器。
1.2 试药
黄芪甲苷对照品(批号:110781-200311,供含量测定用,中国药品生物制品检定所);胎乐颗粒(批号:091215、091220、091225,湖南省妇幼保健院药剂科制剂室),甲醇、乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Phenomenon-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水(33∶67)为流动相;蒸发光散射检测器漂移管温度:50℃,气流量:1.5 L/min,增益:4,理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每毫升约含0.5 mg的溶液,即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取样品适量,研细,取约10 g,精密称定,加水50 ml使溶解,用以水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次30 ml,合并正丁醇液,用氨试液30 ml分2次洗涤,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,移至5 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
2.4 阴性样品溶液的制备
另按处方配比称取除黄芪以外的其他药材适量,按制备工艺制成缺黄芪的阴性样品,同法制备缺黄芪的阴性样品溶液。
2.5 专属性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液适量,注入液相色谱仪,结果表明供试品色谱中黄芪甲苷色谱峰与其他成分的色谱峰分离良好,且阴性样品溶液色谱峰未见干扰,见图1。
2.6 线性关系的考察
精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.504 mg/ml)2、5、10、15、20 μl,注入高效液相色谱仪,测定色谱峰面积,以峰面积对数值为纵坐标,进样量(μg)对数值为横坐标,绘制标准曲线。其回归方程:Y=1.501 9X+2.790 8(r=0.999 3),结果表明,黄芪甲苷对照品在1.008～10.080 μg范围内的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系。
2.7精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl,在上述色谱条件下,分别进样6次,得黄芪甲苷峰面积对数值的RSD=0.80%,结果表明本方法精密度较好。
2.8 稳定性试验
取“2.3”项下供试品溶液,分别于放置0、2、4、8、12、24 h时进行测定,测得黄芪甲苷峰面积对数值的RSD=0.08%,结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.9 重复性试验
取同一批样品,共6份,按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液,在上述色谱条件下测定黄芪甲苷的含量,结果平均含量2.42 mg/袋(8 g),RSD=1.64%,结果表明本方法重复性较好。
2.10 加样回收率试验
取已测定含量的样品适量,共6份,精密称定,分别加入黄芪甲苷对照品溶液2 ml(0.72 mg/ml),按“2.3”项下方法制备样品溶液,测定色谱峰面积,计算加样回收率,结果见表1。
2.11 样品含量测定
取样品3批,按“2.3”项下方法制备样品溶液,按上述色谱条件进行测定,黄芪甲苷对照品浓度为0 ......
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