乳酸菌同源重组载体的构建与鉴定
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赵学峰 罗丽贞 区云枝 南方医科大学附属南海医院;
【摘要】目的:构建乳酸菌同源重组载体,实现外源基因在乳酸菌中的整合型表达。方法:根据乳酸菌L.lactisMG1363全基因组中ThyA基因序列设计引物,PCR扩增乳酸菌基因组中ThyA基因起始密码上游及终止密码下游约1000bp的基因序列,将获得的目的基因依次克隆至载体pMUTIN4中,以琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,以双酶切技术、DNA测序予以确证。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示,目的基因成功扩增,双酶切及DNA测序结果证实,成功构建了同源重组载体pThyA-up-down。结论:乳酸菌同源重组载体pThyA-up-down为实现外源基因在乳酸菌中的非抗性、整合型表达奠定了基础。
【关键词】 乳酸菌 同源重组 ThyA
【分类号】R346
乳酸菌(lactic-acid bacteria)广泛存在于人、畜、禽的肠道,能够调节机体胃肠道正常菌群生态平衡,提高食物消化率和生物价,降低血清胆固醇,控制机体内毒素、肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生,制造营养物质,刺激组织发育,从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物
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【摘要】目的：构建乳酸菌同源重组载体，实现外源基因在乳酸菌中的整合型表达。方法：根据乳酸菌L.facttis MG1363全基因组中ThyA基因序列设计引物，PCR扩增乳酸菌基因组中ThyA基因起始密码上游及终止密码下游约1 000 bD的基因序列，将获得的目的基因依次克隆至载体pMUTIN4中，以琼脂糖凝胶电泳检测目的条带，以双酶切技术、DNA测序予以确证。结果：琼脂糖凝胶电泳结果显示，目的基因成功扩增，双酶切及DNA测序结果证实，成功构建了同源重组载体pThyA-up-down。结论：乳酸菌同源重组载体pThyA-up-down为实现外源基因在乳酸菌中的非抗性、整合型表达奠定了基础。
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