大鼠胃平滑肌细胞的体外分离与三维支架培养方法
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郑毅雄 张鲁清 包祺 陈奇 姜明 陈力 浙江大学医学院附属第二医院外科;
【摘要】目的:探讨复合胶原酶和胰蛋白酶解离大鼠胃平滑肌细胞,建立稳定的胃平滑肌细胞体外培养模型,并探讨其三维复合培养的可行性。方法:0.2%Ⅰ型胶原酶和0.05%胰蛋白酶酶解大鼠胃平滑肌,用相差显微镜观察细胞学形态与生长情况,免疫组化鉴定平滑肌细胞;采用纤维蛋白胶作为细胞外基质建立三维PLGA复合物培养模型,荧光显微镜观察复合物中的细胞活性。结果:平滑肌组织裂解充分均匀,细胞接种成功率高,1～2周细胞可传代,传代后细胞呈典型的"峰-谷"样生长;α-平滑肌肌动蛋白免疫组化染色证实所获得的平滑肌细胞,荧光显微镜下观察到PLGA支架内细胞均匀分布,存活率达90%以上。结论:酶解分离法可获得高纯度大鼠胃平滑肌细胞,三维支架培养在体外成功培养胃平滑肌细胞复合物,为深入研究胃组织工程再生奠定了基础。
【关键词】 大鼠 平滑肌细胞 原代培养 三维支架培养
【基金】浙江省科技厅国际科技合作项目(No.2007C34001)
【分类号】R329
全胃切除的患者常常会出现倾倒综合征、反流性食管炎、营养不良和贫血等问题,使得患者的生活质量下降。尽管各种胃替代手术方法被用于临床中,但是重建方式的有效性仍颇受争议。新近的组织工程技术使得胃肠道的人工再造成为可能,研究表明,利用种子细胞、支架材料以及相应的生
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【摘要】目的：探讨复合胶原酶和胰蛋白酶解离大鼠胃平滑肌细胞，建立稳定的胃平滑肌细胞体外培养模型。并探讨其三维复合培养的可行性。方法：0.2%I型胶原酶和0.05%胰蛋白酶酶解大鼠胃平滑肌，用相差显微镜观察细胞学形态与生长情况，免疫组化鉴定平滑肌细胞；采用纤维蛋白胶作为细胞外基质建立三维PLGA复合物培养模型。荧光显微镜观察复合物中的细胞活性。结果：平滑肌组织裂解充分均匀，细胞接种成功率高，1-2周细胞可传代，传代后细胞呈典型的“峰一谷”样生长；a-平滑肌肌动蛋白免疫组化染色证实所获得的平滑肌细胞，荧光显微镜下观察到PLGA支架内细胞均匀分布，存活率达90%以上。结论：酶解分离法可获得高纯度大鼠胃平滑肌细胞，三维支架培养在体外成功培养胃平滑肌细胞复合物，为深入研究胃组织工程再生奠定了基础。
[关键词]大鼠；平滑肌细胞；原代培养；三维支架培养
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