姜黄素对人食管癌Ec-9706细胞增殖及凋亡的影响
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[摘要] 目的：探讨姜黄素对人食管癌Ec-9706细胞增殖及凋亡的影响。方法：选用人食管癌Ec-9706细胞体外培养，MTT法测定不同浓度的姜黄素对其的增殖抑制作用；流式细胞仪检测凋亡。结果：姜黄素可明显抑制细胞生长，其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系。流式细胞分析仪结果表明，姜黄素能使Ec-9706细胞在加药后24 h出现凋亡峰。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡，出现核边集及染色质浓缩成块状。结论：姜黄素可抑制Ec-9706细胞的生长，其机制可能与诱导细胞凋亡有关。
[关键词] 姜黄素；Ec-9706细胞；凋亡
[中图分类号] R735.1 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2010)11(c)-160-01
食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2%。姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种酚性色素，具有抗感染、抗菌、抗肿瘤、降血脂的作用，尤其是抗肿瘤作用备受关注[1]。体外实验显示姜黄素能够诱导多种细胞株的凋亡，但对食管癌细胞的作用则报道较少。本文旨在探讨姜黄素对人食管癌细胞株Ec-9706体外增殖及凋亡的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
人食管癌细胞株由郑州大学基础医学院病理生理教研室提供，姜黄素为华北制药公司产品。
1.2 方法
1.2.1 细胞的培养按常规方法，用含10%新生牛血清的RPIM1640培养液，在37℃，5%CO2培养箱内培养。
1.2.2 MTT法检测细胞生长抑制率取对数生长期的Ec-9706细胞用0.25%胰酶，EDTA混合液消化，以5×104个/ml，接种于96孔组织培养板中，37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后，分别加入不同浓度的姜黄素，实验终止前4 h每孔加MTT液20 μl，去培养液，再加200 μl二甲基亚砜，测量OD值，计算抑制率。抑制率(%)=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%
1.2.3 流式细胞仪分析细胞周期用10、25、50 μmol/L的姜黄素处理的Ec-9706细胞，固定、PBS冲洗。37℃孵育60 min，抽取小分子DNA，加碘化丙啶PI染色液，测定细胞周期。
1.2.4 透射镜下观察细胞形态25 μmol/L的姜黄素作用Ec-9706细胞48 h，收集细胞，PBS洗2次，离心，用2.5%戊二醛固定细胞团，脱水、包埋、切片和染色，透射电镜观察细胞超微结构。
1.3统计学方法
采用t检验和χ2检验。
2 结果
2.1 姜黄素对Ec-9706细胞增殖的影响
随着药物浓度的增加，姜黄素对Ec-9706细胞的抑制率逐渐加强，即存在着剂量依赖关系，有显著性差异(P<0.01)。见表1。
2.2 姜黄素对Ec-9706细胞周期的影响
见表2。从表2可以看出，细胞周期发生明显变化。G0/G1期比例降低，S期、G2/M期比例均增高，呈剂量依赖关系，且可以观察到S期细胞也随着浓度增加而明显增加。
2.3 透射电镜观察细胞超微结构
透射电镜下可见处理组细胞体积变小，细胞核出现边集现象，同时可以看见细胞内染色质浓缩在一起。
3 讨论
姜黄素是姜黄的主要成分，有明显的抗肿瘤作用[2-4]，是新近研究的抗癌新药。细胞凋亡是由死亡信号诱发的受调节的细胞死亡过程。从结果看，随姜黄素剂量的增加，其对Ec-9706细胞的抑制作用逐渐增强，存在一定的量效依赖关系。姜黄素能使Ec-9706细胞停滞于DNA合成期，不能顺利进入G2/M 期。从结果可知，处于S期的细胞明显增加，而处于G0/G1期和G2/M 期细胞均明显减少。姜黄素的这一作用主要是通过抑制胸腺嘧啶脱氧核苷激酶的活性来实现的。本研究证实了姜黄素可以通过影响细胞周期的作用，使肿瘤细胞生长延迟并逐渐走向死亡。在不久的将来，它将成为一种高效、低毒的抗肿瘤药物。
[参考文献]
[1]Inano H, Onada M, Inafuku N, et al ......
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