连翘挥发油的成分分析及抗病毒活性的考察
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2.2 抗乙型肝炎病毒活性实验
2.2.1 测试原理以2.2.15细胞为乙型肝炎病毒载体，测定样品抑制乙型肝炎病毒进行DNA复制和产生HBsAg、HBeAg的能力。
2.2.2 样品处理样品临用前溶于DMSO配成适当浓度，检测时用培养液作3倍稀释，共8个稀释度。
2.2.4 测试方法2.2.15细胞种96孔培养板，36 h后按以上稀释度分别加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔，加药96 h后分别更换含不同稀释浓度样品的培养液，于加药后第8天分别收集细胞上清液及2.2.15细胞，采用酶联免疫法检测细胞上清中HBsAg、HBeAg的分泌量，点杂交的方法检测细胞中HBV DNA复制程度，分别计算IC50及SI。
2.3 抗流感甲、乙型病毒实验
2.3.1 测试原理以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(CPE)。
2.3.2 样品处理样品溶于DMSO，再用培养液配成适宜初始浓度， 用培养液作3倍稀释，各8个稀释度。
2.3.3 测试方法MDCK细胞接种96孔培养板，置5%CO2， 37°C培养24 h。MDCK细胞分别加入流感甲型病毒10-4(316倍TCID50)、流感乙型病毒10-3(316倍TCID50)，37℃吸附2 h后倾去病毒液，分别加入不同稀释度药物。 设病毒对照和细胞对照，37°C培养40 h，观察结果，记录CPE，计算各样品抗流感病毒半数抑制浓度(IC50)。
2.4 结果
连翘挥发油化学成分分析结果显示其主要成分是α-蒎烯及β-蒎烯，总相对含量为71.48%，与文献报道基本一致[2]，见表1。连翘挥发油、β-蒎烯与α-蒎烯对2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg分泌均无抑制作用，对2.2.15细胞的HBV DNA复制均无抑制作用；阳性对照药3TC样品对2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg分泌均无抑制作用，对2.2.15细胞的HBV DNA复制有显著抑制作用，IC50为9.19 μg/ml；SI>108.8，见表2；连翘挥发油、β-蒎烯与α-蒎烯对甲型流感病毒(济防90-15)与乙型流感病毒(济防97-13)均无抑制作用，见表3。
3 讨论
连翘抗病毒提取物主要是用连翘的水提物、醇提物、挥发油等；主要成分是苯乙醇苷类、黄酮类及木脂素类；抗病毒实验主要是针对呼吸系统的病毒如合胞病毒(RSV)、腺病毒7(Ad7)、柯萨奇B组病毒3型(CB3)、流感病毒甲3亚型(Fa3)、副流感病毒Ⅲ型(PF3)、埃柯病毒等以及单纯疱疹病毒[1]。
实验结果显示，连翘挥发油及其主要成分即α-蒎烯与β-蒎烯没有抗流感病毒作用，这与文献报道不一致[3]。文献[3]未对连翘挥发油的成分进行分分析，但是文献[1]显示不同产地与不同提取方法所得挥发油主要成分基本一致即α-蒎烯与β-蒎烯，由于实验结果显示两个主要成分均无抗病毒作用，证明它们均无直接的抗流感病毒作用。因此，文献抗流感病毒的结果可能是连翘挥发油中的其他成分发挥的作用或者是连翘挥发油激活小鼠体内其他途径抑制流感病毒的作用。为此，在随后的研究中我们将进一步研究它们对流感病毒等病毒的作用。
[参考文献]
[1]肖会敏,王四旺,王剑波,等.连翘挥发油的成分分析及其药理作用的研究进展[J].时珍国医国药,2008,19(8):2047-2048.
[2]孙杰,姚健,达文燕,等 ......
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