氨茶碱对重症胎粪吸入新生兔的TNF-α和IL-8水平的影响
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1.2 仪器设备
德国stephanie小儿呼吸机，迈瑞便携式多参数监护仪(型号：PM-8000Express)，MARTEL血气分析仪(型号：MCP8850B-130)等。
1.3 胎粪制备
收集数名健康足月新生儿第一次胎粪， 其母亲无产前用药史， 也未接受除维生素K、红霉素眼膏以外的药物， 胎粪未被尿液污染， 真空冷冻干燥。研磨成粉末状，用无菌生理盐水稀释成45 mg/ml浓度的均匀胎粪悬混液，分装-20℃保存，待用。
1.4 方法
1.4.1 建立重度胎粪吸入动物模型[3]
固定，仰卧位，2%利多卡因局麻下气管插管，胶布固定，记录生理参数，通气对照组、氨茶碱对照组和氨茶碱组气管导管内注入4 ml/kg的胎粪混合物，分2次注入，每次2 ml/kg。继而注入2 ml空气，两次注入之间使用复苏气囊按压5 min，确保胎粪均匀进入支气管及肺泡。灌注全程给100%氧气。
1.4.2 机械通气通气模式：同步间歇指令(SIMV)，吸入氧浓度(FIO2)：0.25～0.5，吸气峰压(PIP)为10～16 cm H2O(1 cm H2O=0.098 kPa)，呼气末压(PEEP)为0.5～3.0 cm H2O，呼吸频率(RR)为10～40次/min，吸气时间(TI)为0.25～05 s；参数调节以维持潮气量正常范围(4～10 ml/kg)、正常血氧饱和度(85%以上)及血气值为准。
1.4.3 氨茶碱的应用方法
胎粪吸入综合征模型制备后，氨茶碱组0.5 h和2.5 h静脉注射氨茶碱(2.0 mg/kg)，氨茶碱用生理盐水稀释成1∶10，并在5 min内缓慢注入，通气对照组、氨茶碱对照组在同样时间静脉注射等量的生理盐水，氨茶碱组和氨茶碱对照组均通气6 h后处死，收集标本。
1.4.4 标本采集
支气管肺泡灌洗液：取左肺组织，用生理盐水(30 ml/kg)经气管反复支气管肺泡灌洗5次，收集灌洗液离心，上清液分装保存待测。肺组织匀浆：右肺中上叶加生理盐水，经匀浆机匀浆，制成匀浆液，离心(1 500 r/min)10 min后取上清液，-30℃保存待检。
1.4.5检测指标和方法
b计算各组肺组织湿干重比(W/D)及肺组织匀浆和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8含量。后两者先采用酶联免疫吸附法(EL1SA)检测，再在RT-6000型酶标仪上测450 nm处的OD值。
1.5 统计学处理
实验数据以均数±标准差(x±s)表示，用SPSS 13.0软件进行分析，以One-Way ANOVA分析组间差异，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组TNF-α及IL-8的变化情况
氨茶碱组和氨茶碱对照组比较，肺组织匀浆和BALF中TNF-α和IL-8含量降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。氨茶碱组、氨茶碱对照组、通气对照组分别与空白组比较，肺组织匀浆和BALF中TNF-α和IL-8含量升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)，氨茶碱组、氨茶碱对照组与通气对照组比较，肺组织匀浆和BALF中TNF-α和IL-8含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
2.2 肺组织湿干重比(W/D)
氨茶碱组和氨茶碱对照组比较，肺组织湿干重比(W/D)差异有统计学意义(P<0.05)，氨茶碱对照组、氨茶碱组、通气对照组与空白组比较，肺组织湿干重比差异均有统计学意义(均P<0.05)。氨茶碱组和通气对照组比较，肺组织湿干重比差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。
3 讨论
胎粪吸入综合征是由于胎儿发生宫内窘迫或产时窒息排出胎粪，吸入后胎粪到达各级气管、支气管及肺泡，引起肺组织一系列的病理生理改变，从而发生肺部病变。MAS的发生机制包括气道的机械性阻塞、表面活性物质的失活、肺动脉高压、肺部的化学性炎症损伤[4]。胎粪的胆酸、胆盐、胆绿素、胰酶、肠酶等均可导致肺损伤，释放出细胞因子，引起肺部的炎性反应，炎性反应又加重细胞因子的释放，其再加重炎性反应，如此形成恶性循环。
在MAS的发生中有多种细胞因子如IL-8、TNF-α[5]等，参与其病理生理过程。其中IL-8作为促炎性因子，在其发生中起了重要作用。胎粪中含有IL-8，对中性粒细胞具有趋化作用[6]。TNF-α是单核-巨噬细胞在内毒素、炎性介质、IL-1等细胞因子的作用下以自分泌方式生成的一种多肽，炎症早期，肺泡巨噬细胞激活，TNF-α产生增加，并促使中性粒细胞聚集、迁移至肺内，使中性粒细胞成为分布最广、数量最多的炎性细胞，同时又是TNF-α更大的来源。Kojima等[7]和Hageman等[8]先后报道了随着胎粪的吸入，肺部伴有中性粒细胞和肺泡巨噬细胞聚集，并释放一些生物活性物质产生炎症反应，从而引起胎粪性肺损伤。
氨茶碱为黄嘌呤类药物，为茶碱与乙二胺复盐，其药理作用主要来自茶碱，乙二胺使其水溶性增强。近年来发现氨茶碱除了具有支气管舒张作用外，还具有抗感染和免疫调节等作用[9-10]。氨茶碱是非选择PDE抑制剂，其可能作用机制如下：增加肺内cAMP[11]和GMP水平，导致支气管扩张和肺血管扩张和一些抗感染作用；试验证明茶碱可以减少人血单核细胞和肺泡巨噬细胞产生TNF-α，同时可以抑制TNF-α的基因表达[12]和细胞因子的基因表达[10]；氨茶碱可以增加抗炎因子IL-10的释放，促进中性粒细胞、嗜酸粒细胞和T淋巴细胞的凋亡，抑制TNF-α和前列腺素类的作用[13]。
在本实验中，新生兔胎粪灌注后肺组织匀浆和BALF中IL-8和TNF-α明显升高，提示细胞因子在胎粪吸入性肺损伤中起到重要作用。氨茶碱组和氨茶碱对照组比较，氨茶碱组肺组织匀浆和BALF中IL-8和TNF-α含量降低，氨茶碱组的湿干重比低，提示应用氨茶碱可以减少IL-8和TNF-α的产生，可以减轻重症胎粪吸入新生兔的肺水肿。实验中还发现与通气对照组、空白组比较，氨茶碱对照组和氨茶碱组肺组织匀浆和BALF中TNF-α和IL-8含量明显升高 ......
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